pAb di coniglio DiMethyl-Histone H3-K14 (Q16695/P68431) per WB, IF/ICC, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H3

L'istone H3 è un componente fondamentale del nucleosoma, l'unità ripetitiva base della cromatina. I nucleosoma avvolgono e compattano il DNA, limitando quindi l'accessibilità del DNA ai macchinari cellulari che necessitano del DNA come stampo. Gli istoni svolgono un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. L'accessibilità del DNA è regolata da un complesso insieme di modifiche post-traduzionali (il "codice dell'istone") e dal rimodellamento dei nucleosomi.

Questo anticorpo riconosce la forma dimetilata della lisina 14 (K14) sull'istone H3 umano. Le due isoforme principali sono rappresentate dagli accessioni SWISS Q16695 (Istione H3.1t, espresso nelle cellule testicolari) e P68431 (Istione H3.1, una variante canonica). Entrambe le isoforme si localizzano nel nucleo e nei cromosomi.

La lisina 14 è un residuo critico all'interno della coda N-terminale dell'istone H3 che subisce modifiche post-traduzionali dinamiche, tra cui acetilazione e metilazione, che influenzano la struttura della cromatina e l'espressione genica. La dimetilazione della K14 è associata a specifici risultati trascrizionali e fa parte del più ampio panorama regolatorio epigenetico.

Riferimenti correlati: La funzione del nucleosoma principale è supportata da numerosi studi strutturali e biochimici. Per approfondimenti specifici sulla modificazione, vedere: PMID:19608861, PMID:17194708.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico dimetilato intorno alla K14. Per garantire la specificità per la dimetilazione, considerare la validazione dell'anticorpo contro il peptide K14 non modificato o peptidi con mono-/tri-metilazione alla K14.
• Per il Western blotting, una diluizione iniziale può essere ottimizzata utilizzando frazioni di estratto nucleare; la banda prevista è di ~15 kDa. Confermare la scomparsa della banda in campioni trattati con K14 demetilasi, se disponibile.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC), le condizioni di fissazione e permeabilizzazione possono influenzare l'accessibilità dell'epitopo. È consigliabile testare la fissazione con metanolo rispetto alla formaldeide e includere un controllo di competizione peptidica.
• Per ELISA, utilizzare il peptide immunogeno come controllo positivo e un peptide K14 non modificato come controllo negativo per verificare il legame specifico per la modificazione.
• Si prevede che l'anticorpo reagisca in modo crociato con un'ampia gamma di specie a causa della conservazione della sequenza della coda N-terminale dell'istone H3. Validare nella specie di interesse utilizzando controlli positivi e negativi appropriati.

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