Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-DiMetil-Istone H3-K27 (Q16695/P68431) per Ricerca Epigenetica & ChIP

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'Istone H3

L'istone H3 è un componente fondamentale del nucleosoma, l'unità di base della cromatina. I nucleosomi avvolgono e compattano il DNA, limitandone l'accessibilità ai macchinari cellulari e svolgendo quindi un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica.

L'istone H3 è soggetto a una vasta gamma di modificazioni post-traduzionali (PTM), tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione, citrullinazione e molte altre, collettivamente indicate come "codice istonico". Queste modificazioni regolano dinamicamente la struttura della cromatina e l'espressione genica. La coda N-terminale dell'istone H3 è particolarmente ricca di residui modificabili, con la lisina 27 (K27) che rappresenta un sito critico per gli eventi di metilazione. La di-metilazione di H3K27 (H3K27me2) è associata alla repressione trascrizionale e al mantenimento dell'eterocromatina.

Il genoma umano codifica diverse varianti dell'istone H3. Q16695 (H3-4, nota anche come H3.1t) è un istone specifico del testicolo espresso principalmente nelle cellule testicolari, mentre P68431 (H3C1/H3C2/H3C3/H3C4/H3C6/H3C7/H3C8/H3C10/H3C11/H3C12) rappresenta le varianti canoniche H3.1 dipendenti dalla replicazione espresse nelle cellule somatiche. Entrambe le varianti sono altamente conservate e condividono sequenze N-terminali identiche dove si trova K27. Si localizzano esclusivamente nel nucleo e nei cromosomi, dove formano una parte integrante delle fibre di cromatina.

Riferimenti correlati: UniProt Q16695, UniProt P68431

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Per il Western blot (WB), ci si aspetta una singola banda intorno a 15 kDa corrispondente all'istone H3. Utilizzare controlli positivi e negativi appropriati per confermare l'identità della banda e la specificità per la di-metilazione.
• Per ChIP e ChIP-seq, ottimizzare le condizioni di cross-linking (ad es. formaldeide) e di frammentazione della cromatina. Considerare la validazione dell'arricchimento di loci target noti di H3K27me2 utilizzando qPCR o sequenziamento parallelo.
• L'anticorpo ha reattività incrociata con umano, topo e ratto, e si prevede abbia un'ampia gamma di reattività. Tuttavia, è consigliabile validare le prestazioni nella specifica specie e tessuto di interesse prima di esperimenti su larga scala.
• Per ELISA e dot blot (DB), titolare l'anticorpo e includere passaggi di blocco per minimizzare il legame aspecifico; il peptide immunogeno può servire come controllo positivo.
• Nell'immunoistochimica (IHC) e nell'immunofluorescenza (IF/ICC), notare che l'istone H3 è nucleare; una colorazione di contrasto (ad es. DAPI) può aiutare a visualizzare la localizzazione nucleare. Potrebbe essere necessaria la recupero dell'antigene.

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