Anticorpo policlonale coniglio DiMetil-Istona H3-K36 (Q16695 / P68431) per WB, IHC-P, IF/ICC, ChIP-seq

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istona H3

• L'istona H3 è un componente principale del nucleosoma, che avvolge e compatta il DNA in cromatina. Ciò limita l'accessibilità del DNA ai macchinari cellulari e svolge quindi un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. L'accessibilità del DNA è regolata tramite un complesso insieme di modifiche post-traduzionali, collettivamente note come codice delle istone, e tramite il rimodellamento dei nucleosomi.
• L'istona canonica H3.1 (UniProt P68431) è codificata da più geni dipendenti dalla replicazione (H3C1, H3C2, H3C3, H3C4, H3C6, H3C7, H3C8, H3C10, H3C11, H3C12). La variante H3.1t (UniProt Q16695, gene H3-4), nota anche come H3t o H3/g, è espressa nelle cellule testicolari.
• La dimetilazione della Lisina36 (numerazione convenzionale; corrisponde alla Lisina37 nella sequenza precursore) è una specifica modifica post-traduzionale sulla coda N-terminale dell'istona H3. Questa modifica contribuisce al codice delle istone ed è implicata nell'allungamento trascrizionale e nel mantenimento dell'integrità del genoma. Riferimenti correlati:
  • PMID:15983376
  • PMID:16185088
  • PMID:16267050
  • PMID:16627869
  • PMID:17194708
• Sia l'istona H3.1 che H3.1t si localizzano nel nucleo e nei cromosomi, in linea con i loro ruoli nella struttura e nella funzione della cromatina.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno era un peptide sintetico contenente la Lisina36 dimetilata dell'istona H3 umana, progettato per conferire un'elevata specificità per questa modifica. Per applicazioni critiche, considerare di verificare la specificità tramite saggi di competizione peptidica o analisi Western blot di estratti istonici con stati di metilazione noti.
• Nel Western blot (WB), è prevista una banda a circa 15 kDa. Ottimizzare la diluizione dell'anticorpo e convalidare nel sistema di campione pertinente, utilizzando appropriati controlli di carico.
• Per l'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP e ChIP-seq), confermare l'arricchimento di H3K36 dimetilata nei corpi dei geni attivamente trascritti o in altri target genomici stabiliti. Includere appropriati loci di controllo positivi e negativi per garantire prestazioni di grado ChIP.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P) e nell'immunofluorescenza (IF/ICC), i metodi di fissazione e recupero dell'antigene possono influenzare l'accessibilità dell'epitopo; considerare il test di diverse condizioni per ottenere un segnale ottimale.

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