Anticorpo policlonale coniglio DiMetil-Istona H3-K79 (Q16695/P68431) – Validato per WB, IHC-P, ChIP-seq

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istona H3

• L'istona H3 è un componente principale del nucleosoma, essenziale per l'avvolgimento e la compattazione del DNA nella cromatina. Questa organizzazione strutturale regola l'accessibilità del DNA e svolge un ruolo centrale nella trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione e nella stabilità cromosomica. Riferimenti correlati: UniProt Q16695, UniProt P68431

• L'istona H3 esiste in multiple varianti. L'istona canonica H3.1 (codificata da geni come H3C1–H3C12) è espressa ubiquitariamente, mentre la variante specifica del testicolo H3.1t (H3-4) è espressa principalmente nelle cellule testicolari. Entrambe condividono un'alta similarità di sequenza, incluso il residuo conservato K79. Riferimenti correlati: UniProt Q16695 (specificità tissutale), UniProt P68431

• Le modifiche post-traduzionali (PTM) sull'istona H3, come metilazione, acetilazione, fosforilazione e altre, costituiscono il "codice delle istoni" che governa la dinamica della cromatina. La Lisina 79 (K79) è un sito notevole per la metilazione (mono-, di- e trimetilazione), con la dimetilazione (H3K79me2) implicata nella regolazione trascrizionale, nella riparazione del DNA e nel silenziamento telomerico. Riferimenti correlati: Per modifiche correlate, vedere PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:16457588

• Questo anticorpo è stato sviluppato contro un peptide sintetico che porta K79 dimetilata. È progettato per rilevare specificamente lo stato di dimetilazione dell'istona H3 a K79, con una reattività ampia prevista attraverso molte specie grazie alla conservazione della sequenza. Riferimenti correlati: UniProt Q16695, UniProt P68431

• Localizzazione subcellulare: L'istona H3 si trova principalmente nel nucleo e sui cromosomi, dove forma parte del nucleosoma principale. Riferimenti correlati: UniProt Q16695, UniProt P68431

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Design dell'immunogeno: L'anticorpo è stato generato utilizzando un peptide sintetico contenente K79 dimetilata dell'istona H3 umana (NP_003520.1). Per anticorpi simili specifici per la modifica, considerare l'uso di peptide sintetici con modifiche definite per garantire alta specificità.
• Western blotting (WB): L'istona H3 ha un peso molecolare previsto di ~15 kDa. Per ottenere i migliori risultati, utilizzare istone estratti con acido o lisati cellulari totali, e ottimizzare la percentuale del gel e le condizioni di trasferimento per proteine a basso peso molecolare. Validare nel proprio sistema di campioni.
• Immunohistochemistry (IHC-P) e Immunofluorescence (IF/ICC): Potrebbe essere richiesto il recupero dell'antigene (es. tampone citrato). Testare una gamma di diluizioni dell'anticorpo; notare che la fissazione del tessuto e l'inclusione possono influenzare l'accessibilità dell'epitopo.
• Immunoprecipitazione della cromatina (ChIP/ChIP-seq): Questo anticorpo è elencato per le applicazioni ChIP e ChIP-seq. Assicurarsi di eseguire un corretto cross-linking (es. formaldeide) e una frammentazione della cromatina a frammenti di ~200–500 bp. Includere appropriati controlli positivi e negativi per lo stato di metilazione.
• ELISA e IP: Sono applicabili i protocolli standard. Per IP, la pre-pulizia e l'uso di tamponi di lisi appropriati (es. RIPA per l'estrazione delle istone) possono migliorare il rapporto segnale-rumore.
• Reattività incrociata: L'anticorpo riconosce l'istona H3 umana, murina e di ratto, con un'ampia gamma di specie aggiuntive previste in base all'omologia di sequenza. Verificare sempre la reattività incrociata nella specie target.
• Generale: Come per qualsiasi anticorpo policlonale, considerare la variabilità tra lotti e rivalidare quando si cambia lotto. Conservare come raccomandato (spedito in borsa del ghiaccio) ed evitare più cicli di congelamento-scongelamento.

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