DNMT1 Coniglio pAb per WB, IF/ICC, IP, ELISA - P26358

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di DNMT1

• DNMT1 (DNA (citosina-5)-metiltransferasi 1) è la principale metiltransferasi di mantenimento che copia i pattern di metilazione del DNA sul filamento neo-sintetizzato durante la replicazione del DNA, garantendo l'eredità epigenetica (PubMed:17200670, PubMed:21745816). Riferimenti correlati: PMID:17200670, PMID:21745816

• DNMT1 metila preferenzialmente i dinucleotidi CpG emimetilati ed è essenziale per la fedele propagazione dei pattern di metilazione durante la divisione cellulare (PubMed:21745816, PubMed:26070743). Riferimenti correlati: PMID:21745816, PMID:26070743

• Oltre al mantenimento accoppiato alla replicazione, DNMT1 si associa alla cromatina durante le fasi G2 e M per sostenere la metilazione del DNA indipendentemente dalla replicazione (PubMed:21745816). Riferimenti correlati: PMID:21745816

• DNMT1 media la repressione trascrizionale direttamente attraverso l'interazione con HDAC2 e coordina la metilazione del DNA con le modificazioni degli istoni (PubMed:10888872, PubMed:16357870). Riferimenti correlati: PMID:10888872, PMID:16357870

• Nelle cellule del cancro colorettale, DNMT1 forma un complesso corepressore che media l'ipermethylazione del promotore guidata da KRAS oncogenico e il silenziamento dei geni oncosoppressori (PubMed:24623306). Mantiene anche uno stato trascrizionalmente repressivo dei geni nelle cellule staminali embrionali indifferenziate (PubMed:24623306). Riferimenti correlati: PMID:24623306

• DNMT1 è espresso in modo ubiquitario, con i livelli più alti nei tessuti fetali, cuore, rene, placenta e cellule mononucleate del sangue periferico, e livelli più bassi in milza, polmone, cervello, intestino tenue, colon, fegato e muscolo scheletrico. L'isoforma 2 è meno abbondante dell'isoforma 1.

• DNMT1 contiene un dominio zinc finger di tipo CXXC e subisce modificazioni post-traduzionali regolatorie come acetilazione, fosforilazione e metilazione.

• DNMT1 si localizza nel nucleo e si associa ai cromosomi, in linea con il suo ruolo nella metilazione di mantenimento e nella regolazione trascrizionale.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno copre la regione C-terminale (aa 760-1109) di DNMT1 umano, che comprende il dominio catalitico metiltransferasico; questo design mira al sito attivo e può migliorare il rilevamento di DNMT1 a lunghezza intera.
• Per il western blot, aspettarsi una banda a circa 183 kDa; l'uso di un gel SDS-PAGE a bassa percentuale (es. 6–8%) e tempi di trasferimento prolungati possono aiutare a risolvere questa proteina ad alto peso molecolare.
• I livelli di espressione di DNMT1 variano tra tipi cellulari e tessuti; convalidare le prestazioni dell'anticorpo nel vostro specifico sistema campione utilizzando controlli positivi (es. HeLa, HEK293) e negativi appropriati.
• Per l'immunoprecipitazione, ottimizzare la concentrazione dell'anticorpo e considerare il cross-linking alle perle per ridurre l'interferenza della catena pesante delle IgG a ~50 kDa.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, sono necessari la permeabilizzazione nucleare (es. con Triton X-100) e una fissazione appropriata per l'accesso all'antigene nucleare; la co-colorazione con un marcatore nucleare può confermare la localizzazione.

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