EDA Rabbit pAb per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q92838

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'Ectodysplasin-A (EDA)

• EDA codifica la proteina transmembrana ectodysplasin-A, una proteina di membrana di tipo II che appartiene alla famiglia del fattore di necrosi tumorale (TNF). Può essere scissa proteoliticamente per rilasciare un ectodominio solubile.
• EDA funziona come ligando per i recettori contenenti il dominio di morte EDAR ed EDA2R, innescando vie di segnalazione essenziali per le interazioni epitelio-mesenchimali durante la morfogenesi degli organi ectodermici (PubMed:11039935, PubMed:27144394, PubMed:34582123). Riferimenti correlati: PMID:11039935 PMID:27144394 PMID:34582123
• Lo splicing alternativo genera multiple isoforme con specificità recettoriali distinte: l'isoforma 1 si lega esclusivamente a EDAR, mentre l'isoforma 3 si lega esclusivamente a EDA2R.
• A livello subcellulare, EDA è ancorata alla membrana cellulare tramite un dominio transmembrana N-terminale, ma viene anche secreta a seguito della scissione a una coppia di residui basici.
• EDA è espressa a bassa abbondanza, prevalentemente nelle cellule di origine ectodermica come i cheratinociti, i follicoli piliferi e le ghiandole sudoripare, ed è presente anche nel cuore, fegato, muscolo, pancreas, prostata adulti e nei tessuti fetali.
• Le mutazioni in EDA sono collegate alla displasia ectodermica ipoidrotica legata all'X (XLHED), una condizione caratterizzata da uno sviluppo difettoso di denti, capelli e ghiandole sudoripare.
• Le modifiche post-traduzionali includono glicosilazione e formazione di ponti disolfuro, che sono critiche per il corretto ripiegamento e la trimerizzazione tramite il suo dominio simile al collagene.
• EDA potrebbe anche partecipare all'adesione cellulare, come suggerito dalle somiglianze di sequenza e dagli studi in vitro.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde a un segmento dell'ectodominio EDA (amminoacidi 62–182), che è probabilmente esposto nella forma solubile e può produrre anticorpi che riconoscono sia le isoforme legate alla membrana che quelle secretorie di EDA.
• Per il Western blot (WB), ci si aspetta una banda intorno a 41 kDa per la proteina a lunghezza intera; le isoforme clivate o alternative possono produrre bande aggiuntive. Includere appropriati lisati di controllo positivo da tessuti umani, di topo o di ratto noti per esprimere EDA (es. cheratinociti, pelle).
• Per l'immunoistiochimica (IHC-P) e l'immunofluorescenza (IF/ICC), ottimizzare il recupero dell'antigene e la diluizione dell'anticorpo a causa della tipica bassa espressione di EDA. Validare utilizzando tessuti ricchi di strutture ectodermiche, come la pelle o i follicoli piliferi.
• Essendo un anticorpo policlonale di coniglio, è possibile una variabilità lotto-per-lotto; includere un campione di controllo standard in ogni saggio per monitorare la coerenza.
• La reattività crociata con topo e ratto suggerisce epitopi conservati; validare l'anticorpo nella specie e nel contesto tissutale rilevanti prima di un uso estensivo.
• Per le applicazioni ELISA, questo anticorpo può fungere da reagente di cattura o di rilevamento, ma si consiglia l'abbinamento con un anticorpo monoclonale o un'altra coppia convalidata per i saggi a sandwich.

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