Anticorpo policlonale coniglio EED per WB, IF, IP, ELISA - O75530

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di EED

• La proteina Polycomb EED (Proteina dello sviluppo dell'ectoderma embrionale), designata anche come HEED, COGIS e WAIT-1, è un componente principale del complesso di repressione polycomb 2 (PRC2). Lo splicing alternativo e l'inizio alternativo producono multiple isoforme.
• Come parte del complesso PRC2/EED-EZH2, EED metila l'istone H3 alla lisina-9 e lisina-27, portando al silenzio trascrizionale dei geni bersaglio come HOXC8, HOXA9, MYT1 e CDKN2A.
• EED riconosce l'istone H1 trimetilata alla lisina-26 (H1K26me3), che inibisce l'attività metiltransferasica del PRC2 sull'H3K27 nucleosomiale, mentre il riconoscimento di H3K27me3 propaga il marchio repressivo.
• Il complesso PRC2/EED-EZH2 può anche reclutare DNA metiltransferasi, stabilendo un legame funzionale tra la modifica degli istoni e la metilazione del DNA per una repressione genica stabile.
• EED è localizzata nel nucleo e si associa ai cromosomi, coerente con il suo ruolo nella regolazione della cromatina.
• È soggetta a multiple modificazioni post-traduzionali, inclusa acetilazione, fosforilazione e metilazione, che possono modulare la sua attività e le sue interazioni.
• EED è ampiamente espressa nei tessuti umani, con livelli notevolmente elevati osservati nel cancro al seno e al colono, supportando il suo coinvolgimento nell'oncogenesi.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende i 400 amminoacidi N-terminali di EED umana; questa regione può rilevare la proteina a lunghezza intera e certe isoforme. Validare il rilevamento di qualsiasi variante di splicing specifica nel sistema sperimentale.
• Per il Western blotting (WB), il peso molecolare previsto è di circa 50 kDa. Confermare la dimensione della banda con appropriati controlli positivi e negativi.
• La reattività crociata è riportata per umano, topo e ratto. Verificare la reattività con altre specie se necessario mediante allineamento della sequenza dell'immunogeno.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, eseguire una fissazione standard (es. 4% PFA) e permeabilizzazione (es. 0,1% Triton X-100). È prevista una colorazione nucleare.
• Per l'immunoprecipitazione (IP), utilizzare perle di Proteina A o G e ottimizzare il rapporto anticorpo-lysato. Pre-pulire i lisati per ridurre il background.
• L'idoneità per ELISA è indicata; titolare l'anticorpo e utilizzare la proteina EED ricombinante o un peptide come antigene di rivestimento.
• Data la sovraespressione di EED in certi tumori, includere linee cellulari tumorali rilevanti (es. seno, colono) come controlli positivi.

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