Anticorpo policlonale di coniglio anti-eNOS per WB, IF-P, ELISA - P29474

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione dell'eNOS

• Produce ossido nitrico (NO), una molecola chiave di segnalazione che induce il rilassamento della muscolatura liscia vascolare attraverso la trasduzione del segnale mediata da cGMP, essenziale per la regolazione della pressione sanguigna. Riferimenti correlati: PMID:1378832
• Media l'angiogenesi indotta da VEGF nei vasi coronarici e promuove la coagulazione del sangue attraverso l'attivazione piastrinica.
• Una variante di splicing presente naturalmente è priva di attività eNOS e può ridurre la regolazione dell'eNOS funzionale formando eterodimeri inattivi.
• Si localizza principalmente nella membrana plasmatica e nelle caveole, ma si trova anche nel citoplasma, associata al citoscheletro e nell'apparato di Golgi.
• È altamente espressa nelle piastrine, nella placenta, nel fegato e nei reni, a conferma del suo ruolo nell'omeostasi vascolare e nella funzione piastrinica.
• È regolata da molteplici modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione, miristoilazione e palmitoilazione, e richiede cofattori come FAD, FMN, eme e zinco per la sua attività.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende la regione C-terminale (aa 1000-1203) dell'eNOS umana, il che può consentire il rilevamento sia delle varianti a lunghezza completa sia di quelle troncate; si consiglia di verificare la specificità in modelli cellulari pertinenti che esprimono eNOS.
• Per il Western blot, è prevista una banda migrante a circa 133 kDa. Utilizzare marcatori di peso molecolare ad ampio intervallo e ottimizzare la preparazione dei campioni (ad esempio, utilizzando condizioni riducenti) per ottenere risultati chiari.
• Nell'immunofluorescenza (campioni inclusi in paraffina), possono essere necessari protocolli di recupero antigenico; si raccomanda un test preliminare con controlli positivi noti (ad esempio, cellule endoteliali della vena ombelicale umana).
• L'anticorpo reagisce anche con l'eNOS di topo e ratto grazie alla conservazione della sequenza; validare l'anticorpo con lisati tissutali o cellulari appropriati di queste specie prima di effettuare confronti quantitativi.
• Le applicazioni ELISA possono richiedere titolazioni a scacchiera per determinare le concentrazioni ottimali dell'antigene di rivestimento e dell'anticorpo; l'anticorpo può essere utilizzato per la cattura o il rilevamento in immunodosaggi a sandwich.

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