mAb di coniglio ESRα per WB - P03372

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del recettore degli estrogeni

• Il recettore alfa degli estrogeni (ERα), noto anche come ER-alpha, recettore dell'estradiolo e membro 1 del sottogruppo A della sottofamiglia 3 dei recettori nucleari (NR3A1), è codificato dal gene ESR1 e appartiene alla superfamiglia dei recettori ormonali nucleari.
• Lo splicing alternativo genera multiple isoforme, alcune prive di domini funzionali, che possono modulare l'attività trascrizionale del recettore full-length tramite legame competitivo al ligando o al DNA e eterodimerizzazione. Riferimenti correlati: PMID:10970861
• Dopo il legame con il 17β-estradiolo, ERα subisce un cambiamento conformazionale che promuove l'omodimerizzazione e il legame diretto agli elementi di risposta agli estrogeni (ERE) nei promotori dei geni bersaglio, oppure si associa ad altri fattori di trascrizione (es. AP-1, Sp1, NF-κB) per regolare la trascrizione indipendente da ERE.
• ERα mediano anche la segnalazione estrogenica rapida iniziata dalla membrana, attivando diverse cascate chinasi, ed è essenziale per la regolazione trascrizionale mediata da MTA1 di BRCA1 e BCAS3. Riferimenti correlati: PMID:17922032
• È coinvolto nell'attivazione di NOS3 e nella produzione di ossido nitrico endoteliale, contribuendo all'omeostasi vascolare. Riferimenti correlati: PMID:21937726
• Si localizza prevalentemente nel nucleo, ma si trova anche nel citoplasma, sulla membrana cellulare e nell'apparato di Golgi; la sua distribuzione subcellulare è regolata dinamicamente dal legame con il ligando e dalle modifiche post-traduzionali.
• Le modifiche post-traduzionali includono fosforilazione, palmitoilazione, metilazione, ubiquitinazione e glicosilazione, che influenzano la stabilità, la localizzazione e l'attività trascrizionale del recettore.
• È ampiamente espresso in molti tessuti, ma è notoriamente assente nella ghiandola pituitaria. Riferimenti correlati: PMID:10970861

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde ai residui 495–595 nella regione C-terminale di ESRα umano. Questa regione può essere presente in più isoforme, ma si consiglia di verificare la specificità per l'isoforma utilizzando linee cellulari che esprimono varianti di splicing distinte.
• Per Western blot (WB), il peso molecolare previsto è di 66 kDa; utilizzare marcatori precromati per confermare la dimensione e ottimizzare le condizioni di blocco per ridurre il legame non specifico.
• Durante l'esecuzione dell'immunoprecipitazione (IP), preparare lisati freschi con inibitori appropriati di proteasi e fosfatasi per mantenere la stabilità di ERα.
• Per l'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP), ottimizzare attentamente i parametri di crosslinking e sonicazione, poiché le interazioni di ERα con la cromatina possono essere transitorie e dipendenti dalla stimolazione con il ligando.
• Nella citometria a flusso (colorazione intracellulare), includere un controllo di isotipo e convalidare i protocolli di permeabilizzazione adatti per antigeni nucleari.
• Per ELISA, titolare l'anticorpo come reagente di cattura o di rilevamento contro la proteina ERα ricombinante per stabilire le concentrazioni di lavoro ottimali.
• Tutte le applicazioni sono state convalidate con campioni umani; la reattività con altre specie deve essere confermata sperimentalmente.

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