Anticorpo monoclonale di coniglio GRB2 per WB - P62993

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di GRB2

• GRB2 è una proteina adattatrice non enzimatica che funge da collegamento critico nelle cascate di segnalazione dai recettori superficiali cellulari alle risposte cellulari a valle, inclusa l'espressione genica e vari processi biologici come l'immunità innata e adattativa, l'autofagia, la riparazione del DNA e la necroptosi. Riferimenti correlati: PMID:11016927, PMID:11726515, PMID:37626338
• Nei linfociti T, GRB2 si lega a LAT fosforilato dopo l'impegno del TCR, reclutando SOS1 per attivare la via KRAS/RAF1/MAPK, regolando così l'attivazione, la differenziazione e la funzione dei linfociti T. Riferimenti correlati: PMID:9489702, PMID:12171928, PMID:25870599, PMID:36864087
• Analogamente, nei linfociti B, GRB2 amplifica la mobilizzazione del Ca2+ e l'attivazione della MAP chinasi ERK dopo essere stato reclutato al BCR fosforilato. Riferimenti correlati: PMID:25413232, PMID:29523808
• GRB2 regola il passaggio tra autofagia e necrosi programmata interagendo con componenti del necrosoma (es. RIPK1) e regolatori dell'autofagia (es. SQSTM1, BECN1). Riferimenti correlati: PMID:35831301, PMID:38182563
• Modula la biogenesi dei miRNA attraverso la formazione di un complesso ternario con AGO2 e DICER1. Riferimenti correlati: PMID:37328606
• GRB2 partecipa alla risposta allo stress di replicazione e alla riparazione diretta per omologia (HDR) stabilizzando RAD51 alle forcelle bloccate e regolando il reclutamento di MRE11. Riferimenti correlati: PMID:34348893, PMID:38459011
• Un'isoforma naturale (Grb3-3) non possiede la funzione del dominio SH2 e agisce come dominante negativo, inibendo la segnalazione RAS-ERK e la proliferazione cellulare competendo con GRB2 per il legame con SOS1. Riferimenti correlati: PMID:36171279
• GRB2 è localizzato principalmente nel citoplasma, ma si trova anche nel nucleo, negli endosomi e nell'apparato di Golgi, in linea con i suoi ruoli nel traffico di segnali.
• Le modifiche post-traduzionali includono fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione (legame isopeptidico; inoltre possiede domini SH2 e SH3 che mediano le interazioni con proteine contenenti fosfotirosina e motivi ricchi di prolina.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno comprende il dominio SH3 C-terminale e la regione adiacente, che può riconoscere GRB2 a lunghezza intera e le sue isoforme; verificare la reattività nel proprio sistema modello.
• Per Western blot, GRB2 migra tipicamente a ~25 kDa; utilizzare controlli di caricamento appropriati e convalidare la specificità della banda in campioni di knockdown o knockout.
• Nell'immunoprecipitazione, si consiglia di utilizzare un protocollo di reticolazione o un anticorpo secondario specifico per la catena leggera per evitare interferenze dalla catena leggera IgG di ~25 kDa.
• Per l'immunistochimica e l'immunofluorescenza, si raccomanda l'ottimizzazione dei passaggi di recupero dell'antigene e di blocco per ogni tipo di tessuto.
• La reattività incrociata dell'anticorpo con GRB2 di topo e ratto permette studi cross-specie, ma si consiglia di confermare con controlli positivi e negativi specifici per specie.

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