Anticorpo monoclonale di coniglio contro IKKβ per IF/ICC e ELISA - O14920

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di IKKβ

• IKKβ (subunità beta dell'inibitore della chinasi del fattore nucleare kappa-B), noto anche come IKK2 o NFKBIKB, è una serina/treonina proteina chinasi codificata dal gene IKBKB ed è un componente centrale del complesso canonico IKK che attiva la segnalazione di NF-κB (PubMed:9346484). Riferimenti correlati: PMID:9346484

• Phosphoryla gli inibitori di NF-κB (IκB) su due residui di serina critici, innescando la loro poliubiquitinazione e degradazione proteasomica, permettendo così a NF-κB di traslocare nel nucleo e attivare la trascrizione genica (PubMed:20434986, PubMed:20797629, PubMed:21138416). Riferimenti correlati: PMID:20434986, PMID:20797629, PMID:21138416

• Oltre a IκB, IKKβ fosforila ulteriori componenti della via di segnalazione tra cui NEMO/IKBKG, RELA, NFKB1, TBK1 e IKBKE, che può agire come meccanismo di feedback negativo per prevenire la sovrapproduzione di mediatori infiammatori (PubMed:11297557, PubMed:14673179, PubMed:20410276). Riferimenti correlati: PMID:11297557, PMID:14673179, PMID:20410276

• La chinasi fosforila anche FOXO3, mediando l'inattivazione dipendente dal TNF di questo fattore di trascrizione pro-apoptotico (PubMed:15084260), e altri substrati come NAA10, NCOA3, BCL10 e IRS1 (PubMed:17213322, PubMed:19716809). Riferimenti correlati: PMID:15084260, PMID:17213322, PMID:19716809

• IKKβ è coinvolto nell'attivazione di IRF5 mediante fosforilazione del suo C-terminale per stimolare l'omodimerizzazione e la traslocazione nucleare (PubMed:25326418), e in risposta a LPS, fosforila STAT1 in Thr-749, modulando l'espressione dei geni infiammatori (PubMed:32209697, PubMed:38621137). Riferimenti correlati: PMID:25326418, PMID:32209697, PMID:38621137

• Subcellularmente, IKKβ si trova nel citoplasma, nel nucleo e nelle zolle di membrana. È altamente espresso nel cuore, placenta, muscolo scheletrico, rene, pancreas, milza, timo, prostata, testicolo e sangue periferico.

• Le modifiche post-traduzionali includono acetilazione, idrossilazione, fosforilazione, S-nitrosilazione e ubiquitinazione, riflettendo la sua stretta regolazione.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno utilizzato per generare questo anticorpo monoclonale di coniglio copre gli amminoacidi 450-756, corrispondenti alla regione C-terminale dell'IKKβ umano. Questo progetto può fornire un riconoscimento specifico dell'IKKβ a lunghezza completa in conformazioni denaturate o native.
• Per IF/ICC, si consiglia di utilizzare protocolli appropriati di fissazione (es. 4% PFA) e permeabilizzazione (es. 0,1% Triton X-100), e di convalidare l'anticorpo in linee cellulari che esprimono IKKβ come HeLa o HEK293.
• Nelle applicazioni ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato per la rilevazione diretta o a sandwich; si raccomanda l'ottimizzazione dell'antigene di rivestimento e della diluizione dell'anticorpo.
• Poiché l'anticorpo è prodotto nel coniglio, selezionare anticorpi secondari compatibili per la rilevazione e considerare la potenziale reattività crociata con le immunoglobuline endogene nei campioni di tessuto.
• Includere sempre controlli positivi e negativi (es. lisati di knockout di IKKβ o peptidi di bloccaggio) per confermare la specificità.

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