[Convalidato KD] Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Aurora B per WB, IF/ICC, ELISA - Q96GD4

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'Aurora chinasi B

• L'Aurora chinasi B (AURKB, nota anche come AIK2, AIM1, STK12) è una serina/treonina chinasi che funge da subunità catalitica del complesso passeggero cromosomico (CPC), essenziale per una corretta segregazione cromosomica e la citochinesi (PubMed:11516652, PubMed:12925766, PubMed:14610074). Riferimenti correlati: PMID:11516652 PMID:12925766 PMID:14610074
• Regola gli eventi mitotici chiave fosforilando substrati come BIRC5/survivina, INCENP, istoni H3S10/H3S28 e CENPA, garantendo l'attivazione del punto di controllo del fuso mitotico e l'attacco cinetocoro-microtubuli (PubMed:11784863, PubMed:11856369, PubMed:11756469). Riferimenti correlati: PMID:11784863 PMID:11856369 PMID:11756469
• L'attività di AURKB è potenziata dalla fosforilazione di INCENP tramite un ciclo di feedback positivo con HASPIN ai centromeri (PubMed:11516652, PubMed:21658950). Riferimenti correlati: PMID:11516652 PMID:21658950
• La chinasi è un componente fondamentale del punto di controllo della citochinesi: fosforila CHMP4C per ritardare l'abscissione e prevenire la formazione di ponti cromosomici (PubMed:22422861, PubMed:24814515). Riferimenti correlati: PMID:22422861 PMID:24814515
• Durante la mitosi, AURKB si localizza dinamicamente nel nucleo, ai centromeri, ai cinetocori, ai microtubuli del fuso mitotico e al corpo intermedio, riflettendo i suoi molteplici ruoli nella dinamica cromosomica e nella divisione cellulare.
• È altamente espresso nel timo, nella milza, nel polmone, nel testicolo, nel colon, nella placenta e nel fegato fetale; la sua espressione raggiunge il picco durante le fasi S e G2/M. È spesso sovraespresso nei tumori, con livelli più alti nel fegato metastatico rispetto a quello normale.
• AURKB fosforila l'istone H3 alle posizioni Ser10 e Ser28, un segno distintivo della mitosi e un marcatore comunemente usato per gli studi sul ciclo cellulare (PubMed:11784863, PubMed:11856369). Riferimenti correlati: PMID:11784863 PMID:11856369
• Altri substrati includono KIF2C, RACGAP1, VIM e p53/TP53, che collegano AURKB a diversi processi mitotici e al controllo dei punti di controllo (PubMed:20959462). Riferimenti correlati: PMID:20959462

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno utilizzato è un peptide N-terminale (amminoacidi 1–100) dell'Aurora B umana; per il Western blot, le condizioni denaturanti possono migliorare l'esposizione dell'epitopo. Le bande aspecifiche possono essere minimizzate ottimizzando il blocco e la diluizione dell'anticorpo.
• In IF/ICC, Aurora B mostra una localizzazione dinamica durante la mitosi; i protocolli di fissazione e permeabilizzazione devono essere convalidati per preservare l'antigenicità e l'accesso ai centromeri/corpo intermedio.
• Per l'ELISA, si consiglia di utilizzare l'anticorpo per la cattura o la rilevazione dopo aver confermato il legame con Aurora B ricombinante o nativa, con opportune titolazioni e pozzetti di controllo.
• La convalida KD (knockdown) indica la specificità; tuttavia, confermare la reattività nel proprio sistema di campioni utilizzando appropriati controlli negativi (ad esempio knockout).
• Poiché l'anticorpo ha reattività crociata con topo e ratto, può essere utilizzato in linee cellulari e tessuti di roditori, tuttavia si raccomanda una convalida specifica per la specie.

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