[Convalidato KD] Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-eIF4E per WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - P06730

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di eIF4E

• eIF4E (codificato da EIF4E; alias EIF4EL1, EIF4F) è una proteina di legame al cap dell'mRNA di 25 kDa e la subunità essenziale di riconoscimento del cap del complesso di inizio della traduzione eIF4F, che guida la traduzione cap-dipendente facilitando il reclutamento del complesso pre-iniziale 43S all'estremità 5′ dell'mRNA. Riferimenti correlati: PMID:11606200 PMID:22578813 PMID:22684010
• Lega specificamente la struttura del cap 7-metilguanosina (m7G) degli mRNA e promuove lo svolgimento ATP-dipendente delle strutture secondarie terminali 5′, un passo critico per il legame del ribosoma e lo scanning. Riferimenti correlati: PMID:16271312 PMID:22578813
• Nel nucleo, eIF4E media l'esportazione dell'mRNA formando complessi con LRPPRC e XPO1; facilita il trasporto nucleocitoplasmatico di trascritti specifici come NOS2/iNOS e MDM2, influenzando così la loro espressione citoplasmatica. Riferimenti correlati: PMID:23471078 PMID:22684010
• Nei corpi P citoplasmatici, eIF4E partecipa a un complesso che sequestra mRNA inattivi a livello traduzionale, prevenendone la degradazione e consentendone l'immagazzinamento o la successiva riattivazione traduzionale. Riferimenti correlati: PMID:24335285
• Insieme a EIF4G1, eIF4E è necessario per la traduzione dipendente da TISU (Translation Initiator of Short 5′ UTR), un meccanismo non-scanning che bypassa il requisito dello scanning promosso da eIF1. Riferimenti correlati: PMID:29987188
• eIF4E si localizza in molteplici compartimenti subcellulari: citoplasma (inclusi corpi P e granuli di stress) e nucleo (speckles nucleari, corpi nucleari), una distribuzione che riflette le sue funzioni duali nella traduzione e nell'esportazione dell'RNA.
• La proteina è modificata post-traduzionalmente mediante acetilazione e fosforilazione, che modulano la sua affinità di legame al cap e l'interazione con i partner di legame.
• La disregolazione di eIF4E è associata al disturbo dello spettro autistico e alla tumorigenesi, spesso attraverso riarrangiamenti cromosomici o sovraespressione che alterano i programmi di traduzione cellulare.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno si trova nella regione N-terminale (aa 1-100), un'area non pesantemente modificata; questi anticorpi possono rilevare sia eIF4E fosforilato che non fosforilato, ma gli utenti dovrebbero verificarne la specificità nei propri sistemi.
• Per il Western blot, aspettarsi una banda principale a ~25 kDa; il peso molecolare riportato per eIF4E è 25 kDa (teorico ~25.1 kDa), e può apparire come una singola banda o un doppietto a seconda dello stato di fosforilazione.
• Nell'IHC-P, le condizioni di recupero dell'antigene (es. buffer citrato pH 6.0) dovrebbero essere ottimizzate; i controlli positivi includono tessuti ad alta espressione di eIF4E come testicolo, cellule proliferanti o alcune sezioni tumorali.
• Per l'immunoprecipitazione, utilizzare perle di proteina A o G adatte per anticorpi policlonali di coniglio; il cross-linking dell'anticorpo alle perle può migliorare il recupero di complessi a bassa abbondanza.
• L'IF/ICC può rivelare una colorazione sia citoplasmatica che nucleare; includere appropriati passaggi di permeabilizzazione e blocco, e considerare la co-colorazione con marcatori di corpi P o nucleari per valutare i cambiamenti di localizzazione.

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