Anticorpo monoclonale convalidato KD contro Sharpin di coniglio per WB, IF/ICC, ELISA - Q9H0F6

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di Sharpin

• Sharpin (proteina interagente con il dominio RH associata a Shank), nota anche come SIPL1 (proteina simile alla proteina interagente con Shank 1), è un componente del complesso di assemblaggio della catena di ubiquitina lineare (LUBAC). LUBAC coniuga catene lineari di poliubiquitina in modalità capo-coda ai substrati, svolgendo un ruolo chiave nell'attivazione di NF-kappa-B e nella regolazione dell'infiammazione.
  Riferimenti correlati:
  PMID:21455173 PMID:21455180 PMID:21455181
• Attraverso LUBAC, Sharpin media l'ubiquitinazione lineare di IKBKG (NEMO) e RIPK1, un passaggio essenziale per le vie di segnalazione canoniche di NF-kappa-B e JNK. Questa modifica interferisce con la morte cellulare indotta da TNF, prevenendo così l'infiammazione.
  Riferimenti correlati:
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• Nell'immunità innata, LUBAC contenente Sharpin coniuga catene lineari di poliubiquitina sulla superficie dei batteri che invadono il citosol, formando un rivestimento di ubiquitina che funge da segnale "mangiami" per la xenofagia e promuove l'attivazione di NF-kappa-B. LUBAC estende l'ubiquitina preesistente anziché iniziare l'ubiquitinazione.
  Riferimenti correlati:
  PMID:28481331
• Sharpin partecipa anche alla regolazione della segnalazione Wnt canonica durante l'angiogenesi, insieme alla deubiquitinasi OTULIN, modulando gli eventi di ubiquitinazione lineare.
  Riferimenti correlati:
  PMID:23708998
• La proteina si localizza prevalentemente nel citoplasma e nel citosol, e si trova anche nelle sinapsi, in linea con i suoi ruoli nella trasduzione del segnale e nella funzione neuronale.
• L'espressione è più alta nel muscolo scheletrico e nella placenta, con livelli più bassi nel cervello, cuore, colon, timo, milza, rene, fegato, intestino tenue, polmone e leucociti del sangue periferico. Sharpin è sovraregolato in vari tessuti tumorali, tra cui rene, fegato, ovaio e pancreas.
• Sharpin contiene domini a dito di zinco ed è una fosfoproteina, il che indica una regolazione da parte delle modifiche post-traduzionali. È soggetto a splicing alternativo, che genera molteplici isoforme.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'anticorpo è stato prodotto contro un frammento N-terminale (aa 1-126) di Sharpin umano. Questa regione può essere conservata tra le isoforme note; se applicabile, si consiglia di verificare la copertura delle isoforme.
• Per Western blot (WB) è prevista una banda di circa 40 kDa. Utilizzare lisati di controllo positivo come HeLa o HEK293, che esprimono Sharpin.
• In immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC) è previsto un pattern di colorazione principalmente citoplasmatico e eventualmente sinaptico. Ottimizzare la fissazione e la permeabilizzazione per il tipo cellulare di interesse.
• L'applicazione ELISA è possibile; eseguire un'adeguata titolazione dell'anticorpo e utilizzare proteina Sharpin ricombinante come standard.
• Poiché Sharpin è coinvolto nella segnalazione del TNF, la stimolazione con TNF-alfa può influenzare la sua localizzazione o la formazione di complessi, che possono essere analizzati utilizzando questo anticorpo.

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