Anticorpo monoclonale di coniglio anti-TFEB validato KD per WB, IHC-P, ELISA, ChIP - P19484

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione del TFEB

• Il TFEB (fattore di trascrizione EB), noto anche come proteina 35 basica elica-loop-elica di classe E (bHLHe35), appartiene alla sottofamiglia MiT/TFE dei fattori di trascrizione basici con cerniera leucina elica-loop-elica (bHLH-Zip), che comprende MITF e TFE3.
• Agisce come regolatore principale della biogenesi lisosomiale e dell'autofagia legandosi ai motivi CLEAR (espressione e regolazione lisosomiale coordinata) (5′-GTCACGTGAC-3′) nei promotori dei geni lisosomiali e autofagici. Riferimenti correlati: PMID:19556463, PMID:22692423
• L'attività del TFEB è strettamente controllata dalla fosforilazione sensibile ai nutrienti: in condizioni di alimentazione, la fosforilazione mediata da mTOR su molteplici residui di serina trattiene il TFEB nel citosol; il digiuno o lo stress lisosomiale inibiscono mTOR, determinando una rapida defosforilazione e traslocazione nucleare. Riferimenti correlati: PMID:21617040, PMID:22343943, PMID:22576015
• Nel nucleo, il TFEB dimerizza con sé stesso o con altri membri della famiglia MiT/TFE per attivare la trascrizione di geni bersaglio coinvolti nell'autofagia, nel metabolismo lipidico, nell'omeostasi energetica e nella difesa immunitaria. Riferimenti correlati: PMID:1748288, PMID:29146937
• Inoltre, il TFEB svolge un ruolo nell'immunità adattativa regolando l'espressione di CD40L nelle cellule T e nell'immunità innata antibatterica attraverso l'alchilazione mediata dall' itaconato, che ne promuove la localizzazione nucleare e la biogenesi lisosomiale. Riferimenti correlati: PMID:35662396
• La localizzazione subcellulare è dinamica: principalmente citoplasmatica quando è fosforilato, trasloca nel nucleo in seguito all'attivazione; può inoltre associarsi alla membrana lisosomiale.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 50–173 del TFEB umano (NP_009093.1). Questa regione si trova all'interno del dominio di attivazione trascrizionale N-terminale, relativamente conservato tra uomo, topo e ratto, a supporto della reattività crociata riportata. Per le specie non elencate, si raccomanda un allineamento di sequenza.
• Nel Western blot, il TFEB può apparire come un doppietto tra 44 e 53 kDa a causa della fosforilazione differenziale o dello splicing alternativo; l'uso di inibitori delle fosfatasi freschi nel tampone di lisi può contribuire a preservare le fosfo-isoforme. L'anticorpo è stato validato per la specificità dopo knockdown (validato KD).
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), le condizioni di recupero antigenico devono essere ottimizzate in base al tipo di tessuto. È possibile osservare una colorazione nucleare e citoplasmatica a seconda dello stato di attivazione del TFEB.
• Per il ChIP, assicurarsi che le condizioni di reticolazione e frammentazione siano ottimizzate per il tipo cellulare utilizzato; l'anticorpo dovrebbe arricchire efficacemente le regioni promotrici contenenti sequenze CLEAR o E-box.
• Eseguire controlli positivi e negativi appropriati (ad es., lisati knockout per TFEB, loci di geni bersaglio noti) durante la messa a punto dei saggi.

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