Anticorpo policlonale convalidato KD contro TFEB di coniglio per WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P19484

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di TFEB

• Il fattore di trascrizione EB è un regolatore principale della biogenesi lisosomiale, dell'autofagia e dei processi metabolici e immunitari correlati.
  Riferimenti bibliografici: PMID:21617040, PMID:22343943, PMID:22576015
• Si lega ai motivi DNA E-box e CLEAR-box dopo dimerizzazione con membri della famiglia MiT/TFE come TFE3 o MITF.
  Riferimenti bibliografici: PMID:1748288, PMID:19556463, PMID:29146937, PMID:22692423
• La fosforilazione di MTOR sensibile ai nutrienti controlla la localizzazione subcellulare di TFEB: la fosforilazione lo trattiene nel citosol, mentre la defosforilazione promuove l'importazione nucleare.
  Riferimenti bibliografici: PMID:21617040, PMID:22343943, PMID:22576015, PMID:22692423
• TFEB promuove l'espressione genica correlata all'autofagia, regolando positivamente la via autofagica.
  Riferimenti bibliografici: PMID:21617040, PMID:22576015, PMID:23434374
• Durante l'infezione batterica, l'itatonato alchila TFEB, innescando la traslocazione nucleare e l'attivazione genica lisosomiale per favorire l'eliminazione del patogeno.
  Riferimenti bibliografici: PMID:35662396
• TFEB si localizza nel nucleo, nel citoplasma e sulla membrana lisosomiale, riflettendo i suoi molteplici ruoli nell'omeostasi cellulare.
• È soggetto a fosforilazione, splicing alternativo e ubiquitinazione, e svolge un ruolo nell'immunità adattativa.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno (amminoacidi 50–173) copre la regione N-terminale comune alle isoforme umane di TFEB, generando probabilmente anticorpi che riconoscono sia la forma full-length che le possibili varianti di splicing. Si consiglia di convalidare il pattern delle bande nei lisati rilevanti.
• Per il WB, il peso molecolare previsto è di 53 kDa, ma la fosforilazione può causare un leggero spostamento verso l'alto. Utilizzare il frazionamento nucleo/citoplasma o campioni con knockout/knockdown di TFEB per confermare la specificità.
• Nell'IF/ICC, TFEB mostra ritenzione citoplasmatica in condizioni di nutrienti abbondanti e accumulo nucleare dopo deprivazione nutrizionale o inibizione lisosomiale. Includere controlli adeguati per verificare i cambiamenti di localizzazione subcellulare.
• Per l'IHC-P, possono essere necessari il recupero dell'antigene e l'amplificazione del segnale; testare con tessuti positivi noti come rene o fegato, dove l'espressione di TFEB è documentata.
• Nell'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento accoppiato alla proteina TFEB ricombinante; ottimizzare le concentrazioni di rivestimento e le condizioni di blocco.
• La reattività crociata con topo e ratto permette studi comparativi, ma convalidare sempre nel contesto biologico specifico della specie a causa di possibili variazioni dell'epitopo.
• Trattandosi di un anticorpo policlonale, le prestazioni possono variare da lotto a lotto; si raccomanda un controllo qualità di routine con uno standard di riferimento per garantire risultati riproducibili.

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