[KD Validato] Anticorpo monoclonale anti-YTHDC1 per WB, IHC-P, IP, ELISA - Q96MU7

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di YTHDC1

• La proteina 1 contenente il dominio YTH (YTHDC1), nota anche come YT521-B o fattore di splicing YT521, è un membro della famiglia di proteine leganti l'RNA con dominio YTH, che riconosce specificamente gli RNA modificati con N6-metiladenosina (m6A). Riferimenti correlati: PMID:25242552, PMID:26318451, PMID:26876937

• YTHDC1 agisce come regolatore chiave dello splicing alternativo, legandosi ai pre-mRNA contenenti m6A e reclutando i fattori di splicing. L'interazione con SRSF3 promuove l'inclusione degli esoni, mentre la competizione con SRSF10 porta all'inibizione del salto degli esoni. Riferimenti correlati: PMID:26876937

• Svolge inoltre un ruolo nell'esportazione nucleare degli mRNA modificati con m6A attraverso il legame simultaneo a SRSF3 e al fattore di esportazione nucleare NXF1, facilitando il trasporto degli mRNA dal nucleo al citoplasma. Riferimenti correlati: PMID:28984244

• YTHDC1 è coinvolta nella regolazione dell'inattivazione del cromosoma X, riconoscendo la m6A sull'RNA Xist e promuovendo la sua attività di repressione trascrizionale, contribuendo così al silenziamento di uno dei cromosomi X nelle femmine dei mammiferi. Riferimenti correlati: PMID:27602518

• Oltre all'RNA, YTHDC1 può anche legarsi al DNA a singolo filamento contenente m6A, suggerendo ruoli più ampi nei processi mediati dagli acidi nucleici. Riferimenti correlati: PMID:32663306

• A livello subcellulare, YTHDC1 è localizzata prevalentemente nel nucleo ed è arricchita negli speckle nucleari, che sono siti di stoccaggio e modificazione dei fattori di splicing, in linea con il suo ruolo nell'elaborazione dei pre-mRNA.

• Le modificazioni post-traduzionali includono fosforilazione e ubiquitinazione (formazione di legami isopeptidici), che possono regolarne l'attività e la stabilità. La proteina ha un peso molecolare previsto di 84,7 kDa, con una banda osservata a circa 85 kDa mediante western blot.

• YTHDC1 è essenziale per lo sviluppo della linea germinale; studi su organismi modello hanno dimostrato la sua necessità per lo sviluppo degli spermatogoni nei maschi e la crescita degli ovociti nelle femmine, probabilmente attraverso le sue funzioni nello splicing alternativo.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde ai 71 amminoacidi N-terminali di YTHDC1 umano. Poiché l'epitopo si trova in una regione condivisa da più varianti di splicing, l'anticorpo può rilevare diverse isoforme; si raccomanda la validazione nella linea cellulare o nel tessuto di interesse.
• Si prevede che l'analisi mediante western blot con questo anticorpo mostri una banda vicino a 85 kDa. È possibile utilizzare lisati di cellule umane, di topo o di ratto, ma il profilo preciso delle bande deve essere confermato nelle condizioni sperimentali adottate.
• Per l'immunoistochimica (IHC-P), si prevede un segnale prevalentemente nucleare, spesso concentrato negli speckle nucleari. Potrebbe essere necessaria l'ottimizzazione del recupero antigenico e della diluizione dell'anticorpo per ciascun tipo di tessuto.
• L'anticorpo è adatto all'immunoprecipitazione (IP) di YTHDC1 endogena; la co-immunoprecipitazione di partner interagenti come SRSF3 può essere studiata con controlli appropriati.
• Le applicazioni ELISA possono essere sviluppate utilizzando questo anticorpo come reagente di cattura o di rilevazione; per i formati ELISA sandwich è consigliabile abbinarlo a un rivelatore policlonale o a una coppia di anticorpi compatibili.
• La validazione mediante knockdown (KD) conferma che il segnale si riduce in seguito alla deplezione di YTHDC1, supportandone la specificità per l'identificazione del bersaglio negli studi di silenziamento genico.

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