Anticorpo policlonale coniglio KIAA0391/PRORP per WB ed ELISA - O15091

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di KIAA0391/PRORP

• KIAA0391/PRORP, noto anche come proteina 3 della ribonucleasi P mitocondriale (MRPP3), è la subunità catalitica della RNasi P mitocondriale.
• Funziona nel complesso RNasi P con TRMT10C/MRPP1 e HSD17B10/MRPP2 per clivare le sequenze leader 5' dai tRNA mitocondriali precursori. Questa attività è strettamente dipendente dalle subunità accessorie. Riferimenti correlati: PMID:18984158, PMID:25953853, PMID:34715011
• La corretta lavorazione del tRNA da parte di PRORP è essenziale per la sintesi proteica mitocondriale e le mutazioni in PRORP causano la carenza combinata della fosforilazione ossidativa 54 (COXPD54), una malattia mitocondriale primaria.
• La proteina si localizza esclusivamente nella matrice mitocondriale, coerente con il suo ruolo nella maturazione del tRNA mitocondriale.
• PRORP è una nucleasi dipendente da metalli che richiede Mg²⁺, Mn²⁺ o Zn²⁺ per la catalisi e contiene un peptide di transito mitocondriale per l'importazione.
• Le modifiche post-traduzionali includono la fosforilazione e il gene subisce splicing alternativo, suggerendo una complessità regolatoria.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione C-terminale (aa 314-583), che è a valle del peptide di transito mitocondriale previsto, quindi l'anticorpo probabilmente riconosce la forma matura.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto della proteina a lunghezza intera è di ~67 kDa; tuttavia, la forma matura elaborata potrebbe essere più piccola. Validare la dimensione della banda rilevata utilizzando lisati mitocondriali appropriati o controlli ricombinanti.
• È stata osservata reattività crociata con il ratto, suggerendo che l'anticorpo può riconoscere il PRORP ortologo nei campioni di ratto; verificare l'omologia di sequenza per altre specie se necessario.
• Nell'ELISA, considerare l'utilizzo della proteina PRORP ricombinante o estratti mitocondriali come antigene di rivestimento; ottimizzare la concentrazione di rivestimento e la diluizione dell'anticorpo.

Dato che PRORP è una proteina mitocondriale, un'estrazione proteica efficiente dalle frazioni mitocondriali può migliorare la sensibilità di rilevamento nel WB.

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