Anticorpo policlonale di coniglio anti-KMT2A per WB, IF/ICC, ELISA - Q03164

Specifiche principali del prodotto e parametri

Background biologico: funzione e localizzazione di KMT2A

• KMT2A (MLL1, ALL-1, HRX) è la subunità catalitica del complesso MLL1/MLL, un'istone metiltransferasi che genera prevalentemente i segni H3K4me1 e H3K4me2 nelle regioni cromatiniche attive, facilitando la trascrizione e la riparazione del DNA. Riferimenti correlati: PMID:12453419 PMID:15960975 PMID:19187761
• L'enzima ha una bassa attività metiltransferasica da solo e richiede l'assemblaggio con altri membri del complesso centrale (es. WDR5, ASH2L, RBBP5) per ottenere la piena competenza catalitica. Riferimenti correlati: PMID:19187761 PMID:26886794
• Si lega alle isole CpG non metilate nei promotori dei geni bersaglio, mantenendo il loro stato ipometilato, ed è fondamentale per l'attivazione trascrizionale di HOXA9, un regolatore chiave dello sviluppo. Riferimenti correlati: PMID:12453419 PMID:20010842 PMID:20677832
• KMT2A si localizza prevalentemente nel nucleo.
• È espresso nel cuore, nei polmoni, nel cervello e nei linfociti T e B, coerentemente con i suoi ruoli nello sviluppo e nell'ematopoiesi.
• Partecipa all'orologio circadiano mediando la metilazione ritmica di H3K4, che stabilisce uno stato cromatinico permissivo per il legame CLOCK-BMAL1 (per similarità).
• Subisce un'auto-metilazione a Cys-3882, una modifica che può modulare la sua attività enzimatica. Riferimenti correlati: PMID:24235145
• KMT2A è un proto-oncogene frequentemente coinvolto in riarrangiamenti cromosomici che producono proteine di fusione oncogeniche, guidando le leucemie linfoblastiche e mieloidi acute.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 2829–2883 vicino al C-terminale; si consideri che questo anticorpo policlonale può riconoscere KMT2A a lunghezza intera (~432 kDa) così come alcune isoforme o frammenti proteolitici.
• Per il Western blot, utilizzare gel SDS-PAGE a bassa percentuale (es. 6%), tempi di trasferimento umido prolungati e includere inibitori delle proteasi nel tampone di lisi per preservare la grande proteina da 432 kDa.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica, aspettarsi una colorazione nucleare; co-colorare con un marcatore nucleare (es. DAPI) e validare la specificità in controlli knock-down o knockout.
• Per l'ELISA, possono essere impiegati protocolli standard indiretti o sandwich; titolare l'anticorpo per determinare le concentrazioni di lavoro ottimali per il proprio sistema di analisi specifico.
• È riportata la reattività crociata con gli ortologhi di topo e ratto; tuttavia, verificare l'omologia di sequenza e la reattività nei lisati delle specie rilevanti prima di esperimenti su larga scala.

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