[Convalidato KO] Anticorpo policlonale coniglio anti-AIF per WB, IF, IHC, ELISA - O95831

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'AIF

• L'AIF, noto anche come proteina della morte cellulare programmata 8 (PDCD8), è codificato dal gene AIFM1 nell'uomo. Esistono molteplici isoforme dovute allo splicing alternativo, inclusa una isoforma pro-apoptotica e varianti specifiche del cervello.
• L'AIF funziona come ossidoreduttasi NADH nel normale metabolismo mitocondriale e come regolatore chiave dell'apoptosi indipendente dalle caspasi. A seguito di stimolazione apoptotica, viene rilasciato dallo spazio intermembrana mitocondriale nel citosol e nel nucleo, dove innesca la condensazione della cromatina e la frammentazione su larga scala del DNA (parthanatos). Riferimenti correlati: PMID:17094969 PMID:20362274 PMID:23217327
• Nel nucleo, l'AIF si lega al DNA in modo indipendente dalla sequenza e induce la frammentazione del DNA cromosomico indipendente dalle caspasi, una caratteristica distintiva del parthanatos. Riferimenti correlati: PMID:27178839 PMID:20362274
• L'AIF interagisce con EIF3G per inibire la sintesi proteica bloccando la macchina di traduzione EIF3 e attiva la caspasi-7, amplificando così l'apoptosi. Riferimenti correlati: PMID:17094969
• L'AIF svolge un ruolo critico nella morte cellulare piconotica indipendente dalle caspasi indotta dall'esposizione a perossido di idrogeno. Riferimenti correlati: PMID:19418225
• Nell'omeostasi mitocondriale, l'AIF partecipa alla biogenesi della catena respiratoria interagendo con CHCHD4 e controllando il suo import mitocondriale. Riferimenti correlati: PMID:26004228
• In condizioni normali, l'AIF è localizzato prevalentemente nello spazio intermembrana e nella membrana interna mitocondriale. Durante l'apoptosi, si transloca nel citoplasma, nella regione perinucleare e nel nucleo.
• L'AIF è espresso in tutti i tessuti umani testati, ad eccezione del cervello (isoforma 5). Viene rilevato nei muscoli, nei fibroblasti della pelle e negli osteoblasti. Notabilmente, l'isoforma 5 è frequentemente down-regolata in vari tumori umani.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione C-terminale (aa 334-613) dell'AIF umano, il che potrebbe consentire il riconoscimento di molteplici varianti di splicing. Per applicazioni come il Western blot (WB), prevedere una banda intorno a 67 kDa. Considerare l'utilizzo di lisati convalidati knockout (KO) per confermare la specificità.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), si noti che l'AIF si localizza prevalentemente nei mitocondri nelle cellule sane, ma si transloca nel nucleo dopo l'induzione dell'apoptosi. Le condizioni di fissazione e permeabilizzazione dovrebbero essere ottimizzate per preservare sia la colorazione mitocondriale che quella nucleare.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), potrebbe essere necessario il recupero dell'antigene per smascherare gli epitopi; testare protocolli standard a base di citrato o EDTA. Validare in tessuti di controllo positivo (es. muscolo, pelle) che esprimono l'AIF.
• Per l'ELISA, la natura policlonale consente l'utilizzo sia come anticorpo di cattura che di rilevamento nei formati sandwich, ma l'abbinamento con un monoclonale può ridurre il rumore di fondo.

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