[Convalidato KO] Anticorpo policlonale coniglio anti-ATG4A per WB, ELISA - Q8WYN0

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di ATG4A

• ATG4A è una proteasi cisteinica che svolge un ruolo chiave nell'autofagia mediando sia l'attivazione proteolitica che la delipidazione delle proteine della famiglia ATG8. Riferimenti correlati: PMID:12473658, PMID:15169837, PMID:17347651
• Taglia l'amminoacido C-terminale delle proteine ATG8 (es. MAP1LC3A, GABARAP, GABARAPL2) per esporre un residuo di glicina, consentendo la loro coniugazione alla fosfatidiletanolammina (PE) e l'inserimento nella membrana. Riferimenti correlati: PMID:12473658, PMID:15169837, PMID:17347651
• ATG4A funge anche da enzima simile alla deubiquitinasi che rimuove ATG8 dai coniugati proteici (ATG8ilazione), contrastando gli adducti ad alto peso molecolare. Riferimenti correlati: PMID:31315929, PMID:33773106
• Esplica attività di delipidazione sulle proteine ATG8 coniugate alla PE, un passaggio cruciale di riciclaggio durante la macroautofagia. Riferimenti correlati: PMID:29458288, PMID:33909989
• Rispetto al suo omologo ATG4B, ATG4A mostra una delipidazione più forte ma un'attività di elaborazione proteolitica più debole. Riferimenti correlati: PMID:29458288
• Oltre alla sua funzione di proteasi, ATG4A promuove la crescita del forisoma durante la mitofagia regolando il traffico di ATG9A e mediando i contatti RE-forisoma. Riferimenti correlati: PMID:33773106
• ATG4A si localizza principalmente nel citoplasma.
• Parole chiave: Splicing alternativo, autofagia, idrolasi, proteasi, trasporto proteico, metabolismo lipidico, via di coniugazione Ubl.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione C-terminale (aa 289-398) dell'ATG4A umano, il che può aiutare a rilevare sia la forma a lunghezza intera che potenziali varianti di splicing che mancano delle porzioni N-terminali.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto è 45kDa; assicurarsi di utilizzare la percentuale appropriata di gel e utilizzare lisati di controllo positivo da linee cellulari umane o murine.
• L'ELISA può essere eseguita utilizzando la proteina ricombinante ATG4A o rivestimento peptidico; considerare una titolazione a scacchiera per ottimizzare le concentrazioni di anticorpo e antigene.
• Essendo un anticorpo policlonale, è possibile una variabilità lotto-per-lotto; convalidare ogni nuovo lotto nell'applicazione prevista.
• La convalida tramite knockout indica la specificità; includere il lisato cellulare KO come controllo negativo nel WB per confermare l'identità della banda.

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