Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Caspasi-9 convalidato KO per WB, IF/ICC, ELISA - P55211

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Caspasi-9

• La Caspasi-9 è un membro della famiglia delle proteasi cisteina-aspartico (caspasi) che funge da caspasi iniziatrice chiave nel percorso apoptotico intrinseco. È codificata dal gene CASP9 (GeneID: 842) ed è anche nota come Proteasi apoptotica Mch-6, APAF-3 e ICE-LAP6.
• Legandosi ad Apaf-1, la caspasi-9 forma l'apoptosoma e subisce attivazione. Successivamente, cliva e attiva le caspasi effettrici a valle, principalmente la caspasi-3 e la caspasi-7, per eseguire l'apoptosi.
• La Caspasi-9 promuove l'apoptosi indotta da danno al DNA in modo dipendente da ABL1/c-Abl. Cliva anche proteoliticamente il poli(ADP-ribosio) polimerasi (PARP) e BIRC6. Il clivaggio di BIRC6 avviene a seguito dell'inibizione del legame BIRC6-caspasi da parte di DIABLO/SMAC. Riferimenti correlati: PMID:36758105 PMID:36758106
• Un isoforma ottenuta da splicing alternativo (isoforma 2) manca di attività catalitica e agisce come un inibitore dominante-negativo della caspasi-9, fornendo un meccanismo di regolazione.
• L'espressione tissutale è ubiquitaria, con i livelli più alti nel cuore (specificamente nei miociti), espressione moderata in fegato, muscolo scheletrico e pancreas, e livelli bassi in altri tessuti.
• Come zimogeno, la caspasi-9 richiede un clivaggio proteolitico per l'attivazione. È ulteriormente regolata da fosforilazione e ubiquitinazione. La proteina è classificata come una proteasi tiolica e la sua struttura 3D è stata risolta.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno utilizzato per generare questo anticorpo copre gli aminoacidi 139–416, che includono il dominio catalitico. Pertanto, l'anticorpo può rilevare sia la forma pro-proteica a lunghezza intera (~46 kDa) che i frammenti attivi clivati. Si consiglia di includere controlli appropriati quando si valuta l'attivazione della caspasi.
• Per il Western blot, ci si aspetta una banda primaria vicino ai 46 kDa in campioni non trattati; possono apparire bande più piccole aggiuntive in seguito all'induzione dell'apoptosi. Convalidare lo schema specifico nel proprio sistema modello.
• Questo anticorpo è stato convalidato KO, indicando un'affidabile specificità per la Caspasi-9 in campioni umani, di topo e di ratto. È adatto per rilevare livelli endogeni.
• Negli esperimenti di IF/ICC, la caspasi-9 si localizza prevalentemente nel citoplasma ma può essere osservata nel nucleo in determinate condizioni apoptotiche. Ottimizzare di conseguenza i protocolli di fissazione e permeabilizzazione.
• Per applicazioni ELISA, valutare questo anticorpo come parte di una coppia abbinata con altri cloni anti-Caspasi-9 per ottenere sensibilità e specificità ottimali.

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