[KO Validato] Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-CDKN2A/p16INK4a per WB, IF/ICC, ELISA - P42771 / Q8N726

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di CDKN2A/p16INK4a

• CDKN2A codifica l'inibitore della chinasi dipendente dalle cicline 2A, noto anche come p16INK4a, soppressore tumorale multiplo 1 (MTS-1) e CDK4I. Funziona come regolatore negativo della progressione del ciclo cellulare inibendo CDK4 e CDK6, prevenendo la fosforilazione della proteina del retinoblastoma.
• La proteina si localizza sia nel citoplasma che nel nucleo, in linea con il suo ruolo nel controllo dell'ingresso nel ciclo cellulare.
• CDKN2A è ampiamente espresso nei tessuti normali, con eccezioni tra cui cervello e muscolo scheletrico. L'isoforma 3 mostra un'espressione specifica del pancreas.
• p16INK4a è un soppressore tumorale frequentemente mutato o deleto in vari tumori, inclusa la sindrome di Li-Fraumeni, sottolineando il suo ruolo critico nel mantenere la stabilità genomica.
• La proteina subisce modificazioni post-traduzionali come acetilazione e fosforilazione, che possono regolare la sua attività e stabilità.
• p16INK4a contiene motivi ripetuti ANK, che facilitano le interazioni proteina-proteina essenziali per la sua funzione inibitoria su CDK4/6.
• Studi funzionali dimostrano che l'induzione di p16INK4a porta all'arresto del ciclo cellulare nella fase G1, evidenziando la sua importanza nella senescenza e nella soppressione tumorale.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico corrispondente agli amminoacidi 1–156 di p16INK4a umano (NP_000068.1). Per il Western blotting, considerare l'uso di lisati cellulari totali da linee cellulari umane note per esprimere CDKN2A. Poiché il prodotto è validato KO, si consiglia di includere un lisato di controllo knockout per CDKN2A per confermare la specificità della banda.
• Il peso molecolare previsto di p16INK4a è di circa 16 kDa, sebbene possano essere rilevate multiple isoforme (8–17 kDa) a causa di splicing alternativo e modificazioni post-traduzionali. Ottimizzare la percentuale di gel e le condizioni di trasferimento per proteine a basso peso molecolare.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), sono consigliati una fissazione appropriata (es. paraformaldeide al 4%) e una permeabilizzazione (es. Triton X-100 allo 0,1%). p16INK4a si localizza sia nel nucleo che nel citoplasma, quindi l'imaging dovrebbe coprire l'intera cellula.
• Nelle applicazioni ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento dopo la validazione contro l'antigene target. Assicurare un corretto tampone di rivestimento e passaggi di bloccaggio per un segnale ottimale.

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