[Convalidato KO] Anticorpo policlonale Anti-HER2/ErbB2 per WB, ELISA - P04626

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di HER2/ErbB2

• HER2/ErbB2 è una proteina tirosin-chinasi recettoriale codificata dal gene ERBB2 (GeneID: 2064) e appartiene alla famiglia dei recettori del fattore di crescita epidermico (EGFR/ErbB). La proteina full-length è una proteina di membrana di tipo I a passaggio singolo di 1255 amminoacidi, con un peso molecolare previsto di 137,9 kDa (osservato a circa 138 kDa).
• Funge da corecettore nei complessi neuregulina-recettore, essenziale per la segnalazione dipendente dal ligando, ma richiede l'eterodimerizzazione con altri membri della famiglia ErbB (es. EGFR, ErbB3, ErbB4) per il legame ad alta affinità con il ligando e l'attivazione della chinasi.
• La segnalazione di HER2 regola la crescita e la stabilizzazione dei microtubuli periferici tramite la via MEMO1-RHOA-DIAPH1, inibisce GSK3B e promuove l'associazione alla membrana di APC e CLASP2, che a sua volta facilita la cattura e la stabilizzazione dei microtubuli.
• Nel nucleo, HER2 agisce come regolatore trascrizionale, legandosi al promotore di PTGS2/COX-2 (sequenza 5'-TCAAATTC-3') per attivare la trascrizione, e promuove anche l'espressione di CDKN1A tramite il coinvolgimento di STAT3 e SRC, nonché la trascrizione del gene dell'rRNA da parte dell'RNA Pol I, potenziando la sintesi proteica e la crescita cellulare.
• La localizzazione subcellulare include la membrana cellulare, la membrana della ruffla, l'endosoma precoce, il citoplasma (regione perinucleare) e il nucleo, riflettendo i suoi diversi ruoli di segnalazione e trascrizione.
• HER2 è overespresso in una vasta gamma di tessuti tumorali, tra cui cancro mammario primario, intestinale tenue, esofageo, renale e orale, rendendolo un biomarcatore critico e un bersaglio terapeutico.
• Le modifiche post-traduzionali chiave includono la fosforilazione (fosfoproteina) e la glicosilazione; la proteina presenta anche un peptide segnale, legami disolfuro e isoforme da inizio alternativo e splicing alternativo.
• Le parole chiave di UniProt evidenziano i suoi ruoli biologici: attivatore, splicing alternativo, legame all'ATP, membrana cellulare, variante patologica, chinasi, recettore, segnalazione, regolazione trascrizionale, transferasi, transmembrana.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• La sequenza dell'immunogeno (aa 1156–1255) si trova nel dominio citoplasmatico C-terminale di HER2; pertanto, ci si aspetta che questo anticorpo riconosca la forma full-length (~138 kDa) in Western blot (WB), con una potenziale rilevazione di isoforme troncate o da splicing alternativo se conservano questo epitopo.
• Per il WB, utilizzare condizioni riducenti; la proteina matura glicosilata e fosforilata può migrare leggermente più in alto. Convalidare la specificità della banda utilizzando linee cellulari HER2-positive e HER2-negative (es. SK-BR-3 vs MCF-7) e, se disponibile, lisati convalidati per KO come indicato dalla convalida del prodotto.
• Nelle applicazioni ELISA, considerare l'uso del rivestimento con peptide o la cattura diretta dell'antigene a causa dell'epitopo intracellulare. Ottimizzare le condizioni di rivestimento e le diluizioni dell'anticorpo nelle matrici di campione pertinenti.
• A causa dell'alta espressione nei tumori, i lisati da linee cellulari di cancro mammario o tessuti tumorali possono produrre segnali forti; includere opportuni controlli di caricamento e normalizzare sulla proteina totale.

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