Anticorpo policlonale anti-ITCH validato KO per WB, ELISA - Q96J02

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di ITCH

• ITCH è una ligasi E3 dell'ubiquitina-proteina che accetta l'ubiquitina dagli enzimi E2 e la trasferisce direttamente ai substrati, catalizzando catene di poliubiquitina legate ai residui Lys-29, Lys-48 e Lys-63 per regolare la stabilità, il traffico e la segnalazione delle proteine. Riferimenti correlati: PMID:11046148 PMID:14602072 PMID:15051726 PMID:17028573 PMID:18718448 PMID:19131965
• In qualità di componente centrale di un complesso di editing dell'ubiquitina con TNFAIP3, TAX1BP1 e RNF11, ITCH promuove lo scambio da Lys-63 a Lys-48 dell'ubiquitina su RIPK1, portando alla sua degradazione proteasomica e alla terminazione della segnalazione infiammatoria TNF/NF-κB. Riferimenti correlati: PMID:19131965
• ITCH ubiquitina la chinasi immunitaria innata RIPK2 tramite catene legate a Lys-63 per modulare la segnalazione NOD2 e indirizza la proteina antivirale mitocondriale MAVS alla degradazione mediata da Lys-48, regolando così negativamente le risposte antivirali. Riferimenti correlati: PMID:19592251 PMID:19881509
• Nelle cellule ematopoietiche, ITCH ubiquitina il fattore di trascrizione NFE2 con legami Lys-63, controllando lo sviluppo delle linee cellulari ematopoietiche, e promuove l'ubiquitinazione e la degradazione di JUNB per limitare la produzione di citochine Th2. Riferimenti correlati: PMID:18718448 PMID:16387660
• ITCH regola lo smistamento endosomiale di recettori come FZD4 e CXCR4 attraverso l'ubiquitinazione di PI4K2A o dei componenti ESCRT-0 HGS e STAM, collegando la stimolazione da parte dei ligandi alle vie endocitiche degradative. Riferimenti correlati: PMID:23146885 PMID:14602072
• La ligasi promuove l'apoptosi attraverso l'ubiquitinazione e la degradazione dei fattori pro-apoptotici p15 BID e TXNIP (in collaborazione con UBR5) e media l'effetto anti-apoptotico della segnalazione EGFR. Riferimenti correlati: PMID:20392206 PMID:29378950
• A livello subcellulare, ITCH si trova sulla membrana cellulare, nel citoplasma, nel nucleo e sulle membrane degli endosomi precoci e degli endosomi, in linea con i suoi diversi ruoli funzionali.
• ITCH è ampiamente espresso nei tessuti umani e viene modificato post-traduzionalmente tramite acetilazione e fosforilazione, che possono regolarne l'attività e le interazioni.

Linee guida sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 1–155 di ITCH umano (NP_001244066.1). Questa regione N-terminale può consentire il rilevamento di ITCH a lunghezza intera e di potenziali varianti di splicing contenenti la regione N-terminale, ma si raccomanda la verifica sperimentale nel sistema di campioni pertinente.
• Per il Western blot, si prevede una banda vicina al peso molecolare previsto di 103 kDa. Utilizzare controlli appropriati (ad esempio lisati knockout per ITCH o trattati con siRNA) per confermare la specificità, soprattutto considerando il ruolo di ITCH come proteina grande e multidominio.
• La reattività crociata è indicata per campioni umani, di topo e di ratto. Validare l'anticorpo nella specie e nel contesto tissutale specifici, poiché i livelli di espressione e le modifiche post-traduzionali possono influenzare il riconoscimento.
• L'anticorpo è adatto per ELISA; ottimizzare le condizioni di cattura e rilevamento utilizzando la proteina ITCH ricombinante o lisati cellulari e abbinarlo a un sistema di rilevamento compatibile.

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