[KO Validato] Anticorpo monoclonale di coniglio anti-PML per WB, IP, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P29590

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione della PML

• La proteina PML, nota anche come TRIM19, è un membro della famiglia dei motivi tripartiti (TRIM) e agisce come ligasi E3 della SUMO-proteina, svolgendo un ruolo centrale nell'assemblaggio dei corpi nucleari PML (PML-NB) e mediando la sumoilazione delle proteine bersaglio.
• La PML inibisce l'esportazione nucleare dell'mRNA mediata da EIF4E riducendo l'affinità di EIF4E per il cappuccio 5' m7G, contribuendo alla sua funzione di soppressore tumorale. Riferimenti correlati: PMID:11500381 PMID:11575918 PMID:18391071
• Lo splicing alternativo genera molteplici isoforme (ad es., da PML-1 a PML-14), che presentano localizzazioni subcellulari e specializzazioni funzionali distinte; le isoforme nucleari sono coinvolte nel rimodellamento della cromatina e nella regolazione genica, mentre le isoforme citoplasmatiche mediano la segnalazione del TGF-beta e limitano la replicazione virale.
• La PML è localizzata prevalentemente nel nucleo, dove forma i PML-NB, ma può essere presente anche nel nucleoplasma, nel citoplasma, nella membrana del reticolo endoplasmatico e nella membrana degli endosomi precoci, a seconda dell'isoforma e del contesto cellulare.
• Le modifiche post-traduzionali, come sumoilazione, acetilazione e fosforilazione, sono fondamentali per la dinamica dei PML-NB e per le interazioni funzionali della PML, influenzandone il ruolo nell'apoptosi, nel ritmo circadiano e nelle risposte antivirali.
• La PML agisce come ligasi E3 della SUMO-proteina, sumoilando substrati virali e cellulari per regolare l'immunità innata antivirale. Riferimenti correlati: PMID:20972456 PMID:28250117
• La PML mostra un'ampia attività antivirale contro virus a DNA e a RNA, inclusi il virus dell'herpes simplex, il virus dell'influenza A, il virus della rabbia e il virus dell'epatite C, spesso sequestrando le proteine virali all'interno dei PML-NB e inibendo la replicazione virale.
• In qualità di soppressore tumorale, la PML regola importanti vie di segnalazione modulando l'attività di p53, RB1, AKT, PTEN e mTOR, contribuendo alla soppressione della crescita e alla senescenza.

Linee guida sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 1-185 della PML umana e copre la regione N-terminale, che include i domini RING finger e B-box; tenere conto di questo aspetto nella progettazione di esperimenti volti a rilevare isoforme specifiche.
• Per il Western blot, è prevista una banda a ~98 kDa; tuttavia, a causa delle molteplici isoforme e della sumoilazione, possono essere osservate bande aggiuntive. Validare con controlli appropriati, soprattutto quando si utilizzano linee cellulari knockout.
• Nell'immunofluorescenza, la PML mostra tipicamente un pattern di colorazione nucleare puntiforme caratteristico dei corpi nucleari PML; la colocalizzazione con marcatori come SP100 può confermare la specificità.
• Per l'immunoistochimica, validare su campioni di tessuto umano e ottimizzare le condizioni di recupero antigenico per garantire una robusta colorazione nucleare. Si noti che l'espressione della PML può essere bassa in alcuni tessuti normali.
• Questo anticorpo è stato validato per studi di knockout; includere controlli knockout appropriati per confermare la specificità nel proprio sistema di campioni.
• Quando viene utilizzato per l'immunoprecipitazione o l'ELISA, considerare la reattività dell'anticorpo con la PML denaturata rispetto a quella nativa e i potenziali epitopi conformazionali dipendenti dal SUMO.

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