[Convalidato KO] Anticorpo policlonale di coniglio anti-PML per WB, IHC-P, ELISA - P29590

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione della PML

• Codificata dal gene PML, la proteina PML è nota anche come E3 SUMO-proteina ligasi PML, proteina della leucemia promielocitica, proteina a dito di zinco RING 71 e proteina contenente il motivo tripartito 19 (TRIM19). Appartiene alla famiglia TRIM e contiene un dominio a dito di zinco RING, un B-box, una regione coiled-coil e un dominio C-terminale soggetto a splicing alternativo, che genera molteplici isoforme con funzioni distinte.
• Agisce come proteina scaffold essenziale dei corpi nucleari PML (PML-NB), strutture subnucleari dinamiche che regolano la soppressione tumorale, il controllo trascrizionale, l'apoptosi, la senescenza, le risposte al danno al DNA e la difesa antivirale reclutando e modulando numerose proteine partner tramite interazioni mediate da SUMO.
• Inibisce l'esportazione nucleare dell'mRNA mediata da EIF4E riducendo l'affinità di legame di EIF4E per il cap 5' m7G degli mRNA target, controllando così l'espressione genica a livello post-trascrizionale. Riferimenti correlati: PMID:11500381 PMID:11575918 PMID:18391071
• Funziona come una E3 SUMO-proteina ligasi che catalizza la coniugazione di SUMO alle proteine substrato, incluse le proteine virali immediate-early, e mostra una robusta attività di sumoilazione dipendente dall'isoforma (in particolare le isoforme PML-3 e PML-6). Riferimenti correlati: PMID:20972456 PMID:28250117
• Le molteplici isoforme (da PML-1 a PML-14) mostrano distinte localizzazioni subcellulari: le isoforme nucleari (es. PML-4) si localizzano nei PML-NB e nel nucleoplasma, mentre le isoforme citoplasmatiche (es. PML-14) si associano al reticolo endoplasmatico e alle membrane degli endosomi precoci, consentendo una segnalazione dipendente dal contesto nei percorsi TGF-beta e altri.
• Le principali modifiche post-traduzionali includono la SUMOilazione (essenziale per la formazione dei PML-NB), la fosforilazione e l'acetilazione, che ne modulano la stabilità, le interazioni e le funzioni di soppressione tumorale.
• Mostra un'ampia attività antivirale contro virus a DNA e RNA (es. herpesvirus, rabbia, influenza, HCV) attraverso meccanismi specifici per isoforma come il sequestro del capside virale, l'inibizione della sintesi di mRNA/proteine virali e l'induzione dell'apoptosi nelle cellule infette.
• Svolge un ruolo fondamentale nella senescenza cellulare e nell'apoptosi regolando positivamente la stabilità e l'attività di p53/TP53 e reprimendo la trascrizione di TBX2 tramite il complesso RBL2/E2F4, collegando la PML all'arresto permanente della crescita.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 300-600 della PML umana (isoforma 1), una regione centrale che si prevede rilevi molteplici isoforme; considerare la verifica della reattività nel proprio sistema modello specifico a causa dello splicing alternativo.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto è di circa 98 kDa, ma le isoforme e le specie sumoilate possono apparire a pesi molecolari superiori; si raccomanda l'uso di un marker proteico di alta qualità e l'ottimizzazione delle condizioni di trasferimento.
• Questo anticorpo è convalidato per la conferma KO (knockout); assicurarsi di includere lisati di controllo KO appropriati negli esperimenti WB per confermare la specificità della banda.
• Per l'IHC-P, le condizioni di recupero dell'antigene (es. tampone citrato pH 6.0 o EDTA pH 9.0) dovrebbero essere ottimizzate ed è consigliabile convalidare i pattern di colorazione rispetto alla distribuzione nota dei PML-NB nei tessuti.
• Nelle applicazioni ELISA, considerare l'uso dell'immunogeno ricombinante come controllo positivo per stabilire la sensibilità e l'intervallo lineare.

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