Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Von Hippel Lindau/VHL validato KO per WB, ELISA - P40337

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di Von Hippel Lindau/VHL

• pVHL è un componente di riconoscimento dei substrati del complesso VCB-Cul2 E3 ubiquitina ligasi e media l'ubiquitinazione dipendente dall'ossigeno delle proteine bersaglio per la degradazione proteasomica.
• Ubiquitina specificamente le subunità alfa del fattore inducibile dall'ipossia (HIF1A, HIF2A) in condizioni normossiche, determinando la degradazione di HIF e la repressione dei geni responsivi all'ipossia. Riferimenti correlati: PMID:10944113, PMID:17981124
• VHL modula inoltre la segnalazione di mTORC1 promuovendo l'ubiquitinazione e la degradazione di RPTOR e regola la degradazione del recettore adrenergico ADRB2 in modo dipendente dall'ossigeno. Riferimenti correlati: PMID:19584355, PMID:34290272
• A livello subcellulare, VHL si localizza nel citoplasma, nella membrana cellulare, nel reticolo endoplasmatico e nel nucleo, in accordo con i suoi ruoli nella degradazione proteica e nel controllo trascrizionale.
• La proteina è espressa nel cervello e nei reni adulti e fetali; le mutazioni associate a malattia sono collegate alla sindrome di von Hippel-Lindau, all'eritrocitosi congenita e al cancro.
• Parole chiave: Soppressore tumorale, inizio alternativo, splicing alternativo, variante associata a malattia.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Per il Western blot, si consiglia di utilizzare una SDS-PAGE riducente e di trasferire il campione su una membrana di PVDF o nitrocellulosa. Il peso molecolare previsto è di circa 24 kDa; pertanto, utilizzare un gel al 10–12% per una risoluzione ottimale.
• Validare la specificità dell'anticorpo utilizzando linee cellulari knockout per VHL o campioni sottoposti a knockdown mediato da siRNA in cellule umane, murine o di ratto, considerata la reattività crociata.
• Per l'ELISA, questo anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevazione; l'abbinamento con un anticorpo monoclonale di diversa clonalità può aumentare la sensibilità nei formati ELISA a sandwich.
• Ottimizzare la diluizione dell'anticorpo nel sistema di analisi pertinente; le diluizioni iniziali tipiche per WB sono 1:500–1:2000, ma si raccomanda una titolazione empirica.

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