[KO Validato] Anticorpo monoclonale di coniglio per Gasdermina E clivata (N-terminale) per WB, IHC-P, ELISA - O60443

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Gasdermina E

• La Gasdermina E (GSDME), nota anche come DFNA5 o ICERE-1, è un membro della famiglia delle proteine formanti pori gasdermine. Viene espressa come un precursore che viene clivato per rilasciare un frammento N-terminale attivo, con multiple isoforme prodotte da splicing alternativo.
• Dopo il clivaggio da parte della caspase-3 (CASP3) o della granzima B (GZMB) a livello dell'Asp270, il frammento N-terminale si trasloca alla membrana plasmatica, oligomerizza e forma pori con un diametro interno di 10-15 nm, innescando la piroptosi e il rilascio di citochine infiammatorie come IL-1β e IL-16. Riferimenti correlati: PMID:27281216, PMID:28459430, PMID:32188940, PMID:33852854
• La piroptosi mediata da GSDME agisce come un meccanismo di soppressione tumorale: la granzima B consegnata dalle cellule natural killer (NK) cliva la GSDME nelle cellule tumorali, inducendo piroptosi e una robusta immunità anti-tumorale. Riferimenti correlati: PMID:21522185, PMID:32188940, PMID:31953257
• A valle della via apoptotica mitocondriale e del danno al DNA, la GSDME può convertire l'apoptosi in necrosi secondaria e piroptosi, parzialmente tramite la segnalazione di p53/TP53. Riferimenti correlati: PMID:28045099, PMID:16897187
• La GSDME mostra attività battericida e promuove la piroptosi in risposta a infezioni microbiche, inclusa la piroptosi placentare indotta dal virus Zika che influisce sugli esiti fetali. Riferimenti correlati: PMID:27281216
• In termini di localizzazione subcellulare, la GSDME a lunghezza intera è principalmente citoplasmatica, mentre il frammento N-terminale clivato si localizza alla membrana cellulare dove forma pori.
• La GSDME è espressa nella coclea e a bassi livelli in molti tessuti, con la più alta espressione nella placenta. Mutazioni nel gene sono associate a disturbi dell'udito non sindromici autosomici dominanti. Riferimenti correlati: PMID:9771715
• Modificazioni post-traduzionali, inclusa la palmitoilazione e la formazione di legami isopeptidici, possono regolare l'attivazione e l'inserimento nella membrana della GSDME.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno dell'anticorpo è progettato intorno al sito di clivaggio Asp270, rendendolo specifico per il frammento N-terminale. Convalidare la specificità nel vostro sistema sperimentale utilizzando controlli positivi e negativi appropriati (ad es., trattati vs. induttori di apoptosi/piroptosi).
• Per il Western blot, aspettarsi bande multiple a causa del precursore non clivato (~55 kDa) e dei frammenti clivati (N-terminale a ~11 kDa e 35 kDa, a seconda dell'isoforma). Ottimizzare le condizioni di caricamento e rilevamento per distinguere queste forme.
• Per IHC-P, eseguire il recupero dell'antigene e testare una serie di diluizioni per ottenere una colorazione ottimale. L'anticorpo è stato validato per campioni umani; la reattività incrociata con altre specie non è riportata, quindi confermare la reattività se si utilizzano tessuti non umani.
• Per ELISA, considerare l'abbinamento con un anticorpo specifico per il C-terminale per un ELISA sandwich per quantificare la GSDME clivata. Eseguire esperimenti pilota per stabilire la sensibilità e l'intervallo dinamico.
• Negli studi sulla piroptosi, monitorare il clivaggio come parametro di lettura; combinare con saggi di attività della caspase-3 o rilevamento della granzima B per approfondimenti meccanicistici.

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