[Convalidazione KO] Anticorpo policlonale di coniglio ERK2 per WB, IF/ICC, ELISA - P28482

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di ERK2

• ERK2, codificato dal gene MAPK1, è anche noto come proteina chinasi attivata da mitogeni 1, chinasi 2 regolata da segnali extracellulari, isoforma p42 della MAP chinasi e MAPK2. È una serina/treonina chinasi essenziale per la cascata di trasduzione del segnale MAPK/ERK, che funziona insieme a ERK1 (MAPK3) in risposta a stimoli diversi.
• ERK2 media un'ampia gamma di processi cellulari tra cui crescita cellulare, adesione, sopravvivenza, differenziazione, regolazione della trascrizione, traduzione, riarrangiamenti citoscheletrici e apoptosi attraverso la fosforilazione di oltre 160 substrati identificati. Questi substrati includono fattori di trascrizione (es. ATF2, ELK1, FOS), elementi del citoscheletro, regolatori dell'apoptosi e regolatori della traduzione. Riferimenti correlati: PMID:35831023
• Oltre alla sua attività chinasi, ERK2 agisce come reprimo trascrizionale che lega una sequenza consenso di DNA [GC]AAA[GC], reprimendo i geni indotti dall'interferone gamma come CCL5, IRF7 e STAT1. Questa funzione repressiva è indipendente dalla sua attività chinasi.
• Subcellularmente, ERK2 si localizza nel citoplasma, nel citoscheletro (incluso fuso, centro organizzatore dei microtubuli e centrosoma), nel nucleo, nelle caveole della membrana e nelle adesioni focali, riflettendo il suo coinvolgimento in processi cellulari dinamici.
• ERK2 è soggetto a molteplici modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione (fondamentale per la sua attivazione), acetilazione e coniugazione simile all'ubiquitina, che regolano la sua attività, stabilità e localizzazione subcellulare.
• La chinasi fosforila specificamente PGK1 in condizioni ipossiche, indirizzandolo verso i mitocondri e sopprimendo la formazione di acetil-CoA dal piruvato. Riferimenti correlati: PMID:26942675

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Questo anticorpo policlonale di coniglio è stato ottenuto contro un peptide sintetico che comprende gli amminoacidi 200–300 di ERK2 umano (NP_002736.3). I ricercatori possono considerare di verificare la reattività nel loro specifico sistema di campioni, specialmente quando si utilizzano modelli non umani, non topo o non ratto.
• Per applicazioni di Western blot (WB), si raccomanda di utilizzare controlli positivi e negativi appropriati, inclusi lisati convalidati per knockout, per confermare la specificità della banda al peso molecolare atteso (~41 kDa).
• Negli esperimenti di immunofluorescenza/ICC, le condizioni di fissazione e permeabilizzazione devono essere ottimizzate, poiché ERK2 si sposta tra citoplasma e nucleo a seconda dello stato di stimolazione; l'uso della privazione di siero e la stimolazione con fattori di crescita può aiutare a visualizzare la localizzazione dipendente dall'attivazione.
• Per ELISA, l'abbinamento con un anticorpo di cattura/rilevamento adatto può aumentare la sensibilità; si consiglia agli utenti di ottimizzare le condizioni di rivestimento e blocco per il loro analita bersaglio.
• Come reagente policlonale, la coerenza tra lotti deve essere monitorata; si suggeriscono misure di controllo qualità di routine per studi a lungo termine.

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