[Convalidato KO] IRF3 Anticorpo monoclonale di coniglio - Q14653

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di IRF3

• IRF3 è un regolatore trascrizionale chiave delle risposte immunitarie dipendenti dall'interferone di tipo I (IFN), svolgendo un ruolo critico nell'immunità innata contro virus a DNA e RNA. Regola la trascrizione dei geni dell'IFN di tipo I (IFN-alfa e IFN-beta) e dei geni stimolati da IFN (ISG) legandosi agli elementi di risposta stimolati da interferone (ISRE) nei loro promotori. Riferimenti correlati: PMID:22394562 PMID:24049179 PMID:25636800 PMID:11846977 PMID:16846591 PMID:16979567
• Nelle cellule non infette, IRF3 risiede nel citoplasma in una forma inattiva. In seguito a infezione virale, segnalazione da RNA a doppio filamento (dsRNA) o da recettori tipo Toll (TLR), viene fosforilato dalle chinasi IKBKE e TBK1, inducendo un cambiamento conformazionale che porta a dimerizzazione, localizzazione nucleare e associazione con CREBBP per formare il complesso fattore 1 attivato da dsRNA (DRAF1), che attiva i geni dell'IFN di tipo I e ISG. Riferimenti correlati: PMID:22394562 PMID:25636800 PMID:27302953 PMID:16154084 PMID:33440148
• IRF3 può attivare distinti programmi di espressione genica nei macrofagi e indurre apoptosi significativa nei macrofagi primari. In risposta all'infezione da virus Sendai, IRF3 viene reclutato da TOMM70:HSP90AA1 nei mitocondri, dove forma un complesso apoptotico TOMM70:HSP90AA1:IRF3:BAX, inducendo apoptosi. Riferimenti correlati: PMID:16846591 PMID:25609812
• IRF3 è un fattore di trascrizione chiave che regola la risposta IFN durante l'infezione da SARS-CoV-2. Riferimenti correlati: PMID:33440148
• La localizzazione subcellulare include citoplasma, nucleo e mitocondrio, coerente con la sua regolazione dinamica durante la segnalazione.
• Le modifiche post-traduzionali includono fosforilazione (critica per l'attivazione), acetilazione, formazione di legami disolfuro, legame isopeptidico e coniugazione Ubl.
• Esso è espresso costitutivamente in una varietà di tessuti, sottolineando il suo ampio ruolo nella difesa antivirale.
• Lo splicing alternativo produce molteplici isoforme, potenzialmente modulando la sua funzione in contesti diversi.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 1-260 di IRF3 umano (NP_001184051.1), coprendo la regione N-terminale che include i domini di legame al DNA e regolatori. Questo design può rilevare sia le forme non fosforilate che quelle fosforilate, rendendolo adatto per monitorare i livelli totali di IRF3.
• Per il Western blotting, considerare l'uso di lisati da cellule stimolate con mimetici virali (es. poly(I:C)) o interferoni per osservare gli shift di banda dipendenti dall'attivazione indicativi di fosforilazione. Convalidare nel sistema di campioni rilevante, come cellule infettate da virus o attivate da TLR.
• Nell'immunoistochimica e immunofluorescenza, la recupero dell'antigene e i metodi di fissazione appropriati dovrebbero essere ottimizzati per preservare la conformazione nativa di IRF3, specialmente mentre subisce la traslocazione nucleare dipendente dalla fosforilazione.
• Per l'immunoprecipitazione, assicurare condizioni di lisi delicate per mantenere le interazioni proteina-proteina, poiché IRF3 forma complessi con partner come CREBBP e TBK1.
• La reattività dell'anticorpo con le specie topo e ratto (basata sull'omologia di sequenza) consente studi cross-specie, ma si raccomanda di verificare la reattività nel specifico modello sperimentale.

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