[Validato KO] pAb coniglio RAG2 per WB, ELISA - P55895

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della RAG2

• Componente fondamentale del complesso RAG, un complesso multiproteico che media la fase di scissione del DNA durante la ricombinazione V(D)J, assemblando un repertorio diversificato di geni delle immunoglobuline e dei recettori delle cellule T nei linfociti B e T in via di sviluppo.
• La RAG2 è necessaria per tutte le attività catalitiche note mediate dalla RAG1 all'interno del complesso RAG, e agisce probabilmente come sensore dello stato della cromatina che recluta il complesso sull'istone H3 trimetilato alla Lisina 4 (H3K4me3).
• La ricombinazione V(D)J implica un meccanismo di scissione del DNA in due fasi: un taglio iniziale a monte dell'eptamero, seguito da una reazione di transesterificazione diretta che genera estremità codificanti a forcina ed estremità di segnale 5'-fosforilate smussate.
• Il complesso RAG svolge anche un ruolo nell'esclusione allelica delle cellule B pre-B, imponendo la clonalità e l'espressione monospecifica del recettore antigenico delle cellule B riposizionando il secondo allele dell'immunoglobulina nell'eterocromatina pericentromerica.
• È localizzata esclusivamente nel nucleo, in coerenza con il suo ruolo nella ricombinazione del DNA e nell'interazione con la cromatina.
• È espressa specificamente nelle cellule delle linee dei linfociti B e T.
• Contiene domini a dito di zinco e lega ioni metallici; è classificata come regolatore della cromatina coinvolto nella ricombinazione del DNA e associata all'immunodeficienza grave combinata (SCID).

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 351-527 della RAG2 umana; questa regione può conferire reattività tra specie diverse, ma deve essere validata nel campione di tuo interesse, specialmente se utilizzi sistemi diversi da uomo e topo.
• Per il Western blotting, considera di utilizzare estratti nucleari da linee di cellule B o T (es. Jurkat, Raji) come controllo positivo, con un peso molecolare previsto di circa 59 kDa.
• Le applicazioni ELISA possono richiedere l'ottimizzazione dell'antigene di rivestimento e delle condizioni di rilevazione; la natura policlonale dell'anticorpo può fornire un segnale robusto, ma può anche presentare sfondo in campioni complessi.
• Poiché l'espressione della RAG2 è limitata ai linfociti in via di sviluppo, assicurati che il tuo sistema sperimentale contenga le popolazioni cellulari appropriate; le cellule primarie o indotte possono richiedere una manipolazione accurata.

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