Anticorpo monoclonale rabbit contro KRAS+HRAS+NRAS per WB, IF/ICC, ELISA - P01111 / P01112 / P01116

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di Pan-Ras (KRAS/HRAS/NRAS)

• La proteina NRas è una piccola GTPasi che funziona come interruttore molecolare nella via di segnalazione Ras-MAPK, controllando la proliferazione e la sopravvivenza cellulare attraverso il ciclo GDP/GTP e l'attività GTPasica intrinseca (PubMed:30712867). Riferimenti correlati: PMID:30712867

• KRAS, HRAS e NRAS sono membri della famiglia classica delle Ras, condividono un'elevata omologia di sequenza; regolano diversi processi cellulari a valle dei recettori dei fattori di crescita, ma ogni isoforma può esibire funzioni distinte e un'espressione tessuto-specifica.

• Subcellularmente, NRas si localizza sulla membrana cellulare e sulla membrana dell'apparato di Golgi, dove trasmette segnali extracellulari agli effettori intracellulari.

• Le modifiche post-traduzionali, tra cui farnesilazione, palmitoilazione e ubiquitinazione, controllano dinamicamente il traffico e la stabilità di NRas; per esempio, l'ubiquitinazione mediata da LZTR1 marca NRas per la degradazione proteasomiale (PubMed:40934300). Riferimenti correlati: PMID:40934300

• Le mutazioni in NRAS, KRAS e HRAS che bloccano le proteine nello stato legato al GTP sono eventi oncogenici potenti, rendendo gli anticorpi pan-Ras strumenti preziosi per la ricerca sul cancro e lo sviluppo di diagnostiche.

• L'anticorpo è stato prodotto contro una regione N-terminale conservata (aa 1-100) di NRAS umano, che è altamente identica tra le tre isoforme, consentendo una rilevazione a spettro ampio.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Sulla base della progettazione dell'immunogeno che bersaglia l'estremità N-terminale conservata di NRAS (aa 1-100), è previsto che l'anticorpo rilevi KRAS, HRAS e NRAS; tuttavia, la reattività specifica per l'isoforma deve essere validata utilizzando proteine ricombinanti o linee cellulari knockout.
• Per WB, si osserva una banda di circa 18kDa in condizioni riducenti; utilizzare controlli di caricamento appropriati e confermare la specificità con silenziamento siRNA o sovraespressione.
• In IF/ICC, consigliamo di fissare le cellule con PFA al 4% e permeabilizzarle con Triton X-100; ottimizzare la concentrazione dell'anticorpo per minimizzare il fondo, poiché i bersagli localizzati sulla membrana possono richiedere una permeabilizzazione delicata.
• Per ELISA, l'anticorpo può essere associato a reagenti di rilevazione appropriati; assicurarsi che il rivestimento della piastra catturi l'antigene nella sua conformazione nativa per una quantificazione accurata.
• Poiché la segnalazione Ras è strettamente regolata, includere controlli per le modifiche post-traduzionali (es. inibitori della farnesilazione) se si studia la traslocazione sulla membrana.

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