Anticorpo Monoclonale Coniglio MDA5 per WB, ELISA - Q9BYX4

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di MDA5

• Codifica per la proteina 1 contenente il dominio elicasi C indotto da interferone (IFIH1), nota anche come MDA5, Helicard e RLR-2. È un recettore immunitario innato citoplasmatico che riconosce il dsRNA virale e l'mRNA non coperto con carenza di 2'-O-metilazione.
• Al legame del ligando, MDA5 interagisce con MAVS sui mitocondri, innescando la fosforilazione mediata da TBK1/IKBKE e l'attivazione di IRF3/IRF7, portando alla produzione di interferoni di tipo I e citochine pro-infiammatorie. Riferimenti correlati: PMID:28594402, PMID:32169843, PMID:33727702
• Agisce come sensore principale per picornavirus (es. EMCV, rinovirus), coronavirus (incluso SARS-CoV-2) e altri virus a RNA come il virus della dengue e il virus del Nilo Occidentale. Riferimenti correlati: PMID:28606988, PMID:33440148, PMID:33514628
• Si localizza nel citoplasma, nei mitocondri e nel nucleo, coerentemente con il suo ruolo nel sensing dell'RNA virale e nella trasduzione del segnale.
• Appartiene alla famiglia dei recettori simili a RIG-I (RLR), contenente due domini CARD N-terminali, un dominio elicasi DExD/H-box e un dominio regolatore C-terminale. Il dominio elicasi lega l'RNA in modo dipendente dall'ATP.
• Le modifiche post-traduzionali includono la fosforilazione e l'ubiquitinazione, che regolano la sua attività e stabilità.
• Ampiamente espresso con livelli più elevati nella placenta, nel pancreas e nella milza; scarso nel cervello, nei testicoli e nel polmone.
• Le mutazioni associate alla malattia in IFIH1 sono collegate alla sindica di Aicardi-Goutières e al diabete mellito, evidenziando il suo ruolo nell'autoimmunità.
• Inoltre, MDA5 potrebbe svolgere un ruolo nell'inibizione della crescita e nell'apoptosi nelle cellule tumorali e migliorare la funzione delle cellule natural killer.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno copre una regione C-terminale (aa 900-1000) di MDA5 umano, conservata tra umano, topo e ratto, supportando la reattività crociata riportata. Validare la reattività specifica per la specie nelle matrici di campione pertinenti.
• Per il Western blotting, l'anticorpo può rilevare bande a ~117 kDa (MDA5 a lunghezza intera) e possibilmente a ~25 kDa; è consigliabile utilizzare un ampio intervallo di peso molecolare e controlli positivi come cellule HeLa o A549 trattate con interferone.
• Nell'ELISA, titolare l'anticorpo contro MDA5 ricombinante o il peptide immunizzante per determinare le concentrazioni di lavoro ottimali; assicurarsi di eseguire correttamente i passaggi di blocco e lavaggio.
• Dato che MDA5 è inducibile da interferone, considerare di stimolare le cellule con IFN-alfa/beta o mimici virali (es. polimero I:C) per up-regolare l'espressione del bersaglio prima della lisi.

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