Anticorpo policlonale coniglio Methyl-HP1 gamma/CBX3 (H175) Q13185 per Dot Blot & ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CBX3 (HP1 gamma)

CBX3, anche noto come HP1 gamma, è un componente dell'eterocromatina che riconosce e lega le code dell'istone H3 metilate alla Lisina-9, determinando una repressione epigenetica. Lega inoltre l'istone H1.4 metilato alla Lisina-26 (H1.4K26me) e viene escluso dalla cromatina quando H1.4 è contemporaneamente metilato e fosforilato. Riferimenti correlati: [PMID:11242053] [PMID:16127177]

Attraverso l'interazione con le proteine del complesso MIS12, CBX3 è coinvolto nella formazione di cinetocori funzionali. Contribuisce alla conversione della cromatina locale in uno stato repressivo simile all'eterocromatina tramite trimetilazione dell'H3 Lisina-9 e media il reclutamento delle metiltransferasi SUV39H1/2 da parte del complesso PER ai geni bersaglio circadiani come PER2 e PER1. Riferimenti correlati: [PMID:15502821]

CBX3 media inoltre il reclutamento di NIPBL nei siti di danno del DNA a livello delle rotture a doppio filamento, evidenziando un suo ruolo nella riparazione del DNA. Riferimenti correlati: [PMID:28167679]

Subcellularmente, CBX3 è una proteina nucleare che si associa all'eucromatina ed è in gran parte escluso dall'eterocromatina costitutiva. Può anche essere associato ai microtubuli e ai poli mitotici durante la mitosi. Riferimenti correlati: [PMID:28977666]

Le modifiche post-traduzionali di CBX3 includono l'acetilazione N-terminale, acetilazioni multiple delle lisine e fosforilazione in diversi residui di serina (Ser93, Ser95, Ser97, Ser99, Ser176), che regolano la sua funzione e le sue interazioni. Riferimenti correlati: [PMID:19608861] [PMID:16964243] [PMID:20068231] [PMID:21406692] [PMID:18669648] [PMID:24275569] [PMID:23186163]

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno copre la regione N-terminale (aa 1‑183) di CBX3 umano; si consiglia di verificare il riconoscimento dell'epitopo quando si utilizzano mutanti di troncamento o saggi specifici per isoforme.
• Per il dot blot (DB), ottimizzare il bloccaggio e la diluizione dell'anticorpo per ridurre al minimo il legame non specifico alla membrana. Si raccomanda una titolazione pilota.
• Per l'ELISA, assicurarsi che il rivestimento dell'antigene corrisponda all'epitopo metilato di interesse. Validare la procedura nel sistema di campionamento appropriato (ad es., estratti nucleari da linee cellulari umane).
• Poiché CBX3 è prevalentemente una proteina nucleare, è necessario utilizzare protocolli di estrazione nucleare per arricchirlo. Evitare condizioni denaturanti severe che possono alterare il riconoscimento dell'epitopo specifico per la forma metilata.
• Utilizzare controlli appropriati (ad es., peptidi ricombinanti di CBX3 metilato vs non metilato) per confermare la specificità per la modificazione metil-H175.
• Questo anticorpo è stato testato solo su campioni umani; la reattività crociata con altre specie non è stata valutata. Validare nella specie bersaglio prima dell'uso.

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