MonoMethyl-Histone H3-K18 (Q16695/P68431) Coniglio mAb per ChIP & CUT&Tag | WB, IHC-P, IF, ELISA

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'Istone H3

Gli istoni sono i principali componenti proteici della cromatina, agendo come bobine attorno alle quali si avvolge il DNA. L'istone H3, insieme a H2A, H2B e H4, forma il nucleosoma core. Questi nucleosomi compattano il DNA e ne regolano l'accessibilità per la trascrizione, la replicazione, la riparazione e la stabilità cromosomica. La coda N-terminale dell'istone H3 è soggetta a numerose modificazioni post-traduzionali (PTM), inclusa metilazione, acetilazione, fosforilazione e altre, che collettivamente costituiscono il "codice degli istoni" e orchestrano la dinamica della cromatina e l'espressione genica.

La lisina 18 (K18) dell'istone H3 (corrispondente alla posizione 19 nel precursore) è un residuo chiave che può essere monometilato. Questa modifica, insieme ad altre PTM in questo sito, influenza il legame delle proteine effettrici e modula la struttura della cromatina. Sebbene l'acetilazione di K18 sia spesso collegata all'attivazione trascrizionale, gli stati di metilazione possono avere effetti dipendenti dal contesto. La monometilazione di H3K18 è stata implicata nella regolazione dell'espressione genica e nel mantenimento della corretta funzione cromatinica.

Riferimenti correlati: PMID:16267050, PMID:16627869, PMID:17194708.

Le voci SWISS Q16695 (Istone H3.1t) e P68431 (Istone H3.1) rappresentano due varianti dell'istone H3 umano. Q16695 è espresso prevalentemente nelle cellule testicolari, dove sostituisce l'H3.1 canonico durante la spermatogenesi. P68431 è un istone dipendente dalla replicazione espresso nelle cellule somatiche ed è ampiamente distribuito. Entrambe le varianti si localizzano nel nucleo e nei cromosomi.

Riferimenti correlati: UniProt Q16695, UniProt P68431.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'anticorpo è stato generato utilizzando un peptide sintetico monometilato attorno a K18. Per garantire la specificità per la forma monometilata, si consiglia di eseguire un saggio di competizione peptidica utilizzando i corrispondenti peptide non modificati o di-/tri-metilati durante la convalida iniziale.
• Per il Western blot (WB), si raccomandano estratti di istoni da cellule umane, di topo o di ratto come materiale di partenza. È prevista una banda specifica attorno a 15 kDa. Eseguire controlli appropriati, inclusi l'anticorpo H3 totale, per confermare il caricamento uniforme.
• Negli esperimenti di immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) e CUT&Tag, la titolazione dell'anticorpo è critica. È consigliabile includere regioni genomiche di controllo positive note per ospitare la monometilazione H3K18 (se disponibili) e loci di controllo negativi. Le condizioni di cross-linking possono influenzare l'accessibilità dell'epitopo; considerare sia protocolli ChIP nativi che cross-linkati.
• Per immunochimica (IHC-P) e immunofluorescenza (IF/ICC), le condizioni di recupero dell'antigene potrebbero richiedere ottimizzazione. Si consiglia l'utilizzo di campioni tissutali o cellulari con livelli documentati di H3K18me1 per stabilire la specificità della colorazione.
• Le applicazioni ELISA e dot blot (DB) possono essere utilizzate per controlli rapidi del titolo e della specificità dell'anticorpo contro vari peptidi in stati di metilazione.

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