mAb coniglio MonoMetil-Isitona H3-K27 (Q16695/P68431) – Anticorpo contro Istona H3 metilata per WB, IF/ICC, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H3

• L'istone H3 è un componente centrale del nucleosoma, che avvolge e compatta il DNA nella cromatina. Questa struttura limita l'accessibilità del DNA ai macchinari cellulari, svolgendo quindi un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. L'accessibilità del DNA è regolata da un complesso insieme di modifiche post-traduzionali degli istoni, chiamato anche codice istonico, e dal rimodellamento dei nucleosomi. Riferimenti correlati: UniProt Q16695, UniProt P68431

• L'istone H3 si localizza nel nucleo e si associa ai cromosomi. Riferimenti correlati: UniProt Q16695, UniProt P68431

• Le isoforme canoniche dell'istone H3.1 (codificate da più geni) sono generalmente espresse nelle cellule in divisione, mentre la variante H3.1t (Q16695) è espressa specificamente nelle cellule testicolari. Riferimenti correlati: UniProt Q16695

• L'istone H3 subisce estese modifiche post-traduzionali, tra cui metilazione, acetilazione, fosforilazione e citrullinazione in residui specifici. La lisina 27 (K27) è un sito di modificazione conosciuto; il suo stato monometilato (H3K27me1) è associato alla regolazione genica. Riferimenti correlati: PMID:16567635

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico monometilato intorno alla K27, il che indica un'elevata specificità per il marcatore H3K27me1. Durante l'utilizzo dell'anticorpo, si consiglia di includere controlli con peptide metilato e non modificato nei saggi di dot blot o ELISA per convalidare la specificità.
• Per il Western blotting (WB), si consigliano estratti acidi arricchiti in istoni o lisati nucleari totali. È possibile utilizzare una quantità di caricamento tipica di 10–20 µg di estratto nucleare, ma si consiglia l'ottimizzazione nel sistema di campione specifico.
• Per l'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), la permeabilizzazione con Triton X-100 o un detergente simile è necessaria per consentire la colorazione nucleare. La co-colorazione con un anticorpo anti-H3 totale può aiutare a normalizzare i segnali di metilazione.
• La reattività crociata è prevista per un'ampia gamma di specie grazie alla conservazione della sequenza; tuttavia, convalidare sempre l'anticorpo nella specie o nel tessuto bersaglio se non è stato testato in precedenza.
• Questo anticorpo è applicabile per la ricerca epigenetica incentrata sulle modifiche istoniche e sulla dinamica della cromatina; valutarne l'utilizzo in applicazioni di tipo ChIP dopo un'attenta convalida.

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