Anticorpo monoclonale di coniglio contro Istone H3-K4 monometilato (Q16695/P68431) per WB, ChIP, IF/ICC e ricerca epigenetica

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H3

L'istone H3 è un componente fondamentale del nucleosoma, la struttura che avvolge e compatta il DNA nella cromatina. Questa compattazione limita l'accessibilità del DNA per i meccanismi cellulari che utilizzano il DNA come stampo, svolgendo quindi un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. L'accessibilità del DNA è finemente regolata da un complesso insieme di modifiche post-traduzionali sugli istoni, note come codice istonico, e dal rimodellamento dei nucleosomi.

L'istone H3 si localizza nel nucleo ed è parte integrante dei cromosomi. Due varianti sono rilevanti in questo contesto: l'istone canonico H3.1 (codificato da geni multipli come H3C1, H3C2 ecc., SWISS P68431) è espresso ubiquitariamente, mentre l'istone H3.1t (SWISS Q16695) è specifico del testicolo. Entrambe condividono lo stesso ruolo fondamentale nella struttura della cromatina.

La lisina 4 dell'istone H3 (H3K4) è un sito principale per diverse modifiche post-traduzionali, tra cui mono-, di- e trimetilazione, acetilazione e altre. La monometilazione di H3K4 (H3K4me1) è tipicamente associata alle regioni enhancer e alla trascrizione genica attiva. Questo anticorpo è stato generato contro un peptide monometilato intorno a H3K4, garantendo specificità per questo stato di modificazione.

Riferimenti bibliografici: PMID:16267050, PMID:16457588, PMID:17194708.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Questo anticorpo è specifico per H3K4 monometilato. Per risultati ottimali, includi campioni di controllo positivo e negativo (ad esempio peptidi con K4 non modificata, mono-, di- o trimetilata) per confermare la specificità.
• Western Blot (WB): Utilizza estratti nucleari o lisati cellulari totali. È attesa una banda a circa 16 kDa. Determina empiricamente la diluizione ottimale dell'anticorpo primario (ad esempio, intervallo di partenza 1:500–1:2000) e abbinalo a un anticorpo secondario coniugato con HRP adeguato.
• Chromatin Immunoprecipitation (ChIP): Adatto per la ChIP. Effettua il cross-linking della cromatina, la frammentazione e l'immunoprecipitazione con l'anticorpo. Convalida l'arricchimento tramite qPCR in loci bersaglio noti di H3K4me1.
• Immunofluorescenza (IF/ICC): Fissa e permeabilizza le cellule in modo appropriato. È attesa una colorazione esclusivamente nucleare. Effettua la controcolorazione con DAPI o un prodotto simile per confermare la localizzazione.
• IHC-P: Il recupero dell'antigene potrebbe essere necessario; ottimizza le condizioni per ogni tipo di tessuto.
• Dot Blot (DB) e ELISA: Assicurati che la concentrazione del peptide e le condizioni di bloccaggio siano ottimizzate per minimizzare il legame non specifico.
• Reattività crociata: Questo anticorpo riconosce un'ampia gamma di specie, comprese le piante (Arabidopsis, riso, grano). Per i campioni vegetali, regola i protocolli di estrazione a causa della parete cellulare rigida e ottimizza le condizioni di rilevazione.

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