Anticorpo monoclonale di coniglio MonoMethyl-Istone H3-K9 | Q16695 / P68431 – Anticorpo specifico per la metilazione per WB, ChIP, ELISA e altro

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'Istone H3

L'istone H3 è un componente centrale del nucleosoma, l'unità ripetitiva fondamentale della cromatina. Svolge un ruolo centrale nel compattare il DNA e nel regolarne l'accessibilità ai macchinari di trascrizione, replicazione e riparazione.

Una caratteristica chiave della biologia dell'istone H3 è l'ipotesi del "codice degli istoni": combinazioni specifiche di modifiche post-traduzionali (PTM) sulla sua coda N-terminale flessibile governano distinti stati della cromatina e processi nucleari a valle. Tra queste PTM, la metilazione in lisina 9 (H3K9me) è uno dei segni più intensamente studiati, spesso associato alla repressione trascrizionale, alla formazione di eterocromatina e alla stabilità genomica.

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La lisina in posizione 9 della proteina H3 matura (corrispondente alla posizione 10 di UniProt) può essere trovata in diversi stati di metilazione—mono-, di- o tri-metilata—ciascuno con esiti biologici distinti. L'H3K9 monometilato (H3K9me1) è principalmente arricchito nei promotori e negli enhancer di geni attivi nelle regioni eucromatiche, dove regola finemente l'attività trascrizionale, sebbene sia stato rilevato anche nell'eterocromatina pericentrica in specifici contesti cellulari.

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L'istone H3 esiste in molteplici varianti codificate da geni diversi. La H3.1 canonica (SWISS P68431) è espressa in modo dipendente dalla replicazione ed è incorporata nella cromatina durante la fase S, mentre la variante testicolo-specifica H3.1t/H3-4 (Q16695) è espressa esclusivamente nelle cellule testicolari e può contribuire alla dinamica cromatinica specifica della spermatogenesi. L'epitopo di questo anticorpo si estende su una regione altamente conservata tra le varianti di H3, consentendo un'ampia rilevazione.

Riferimenti correlati: Nessuno (specificità tissutale basata su record di sequenza)

A livello subcellulare, l'istone H3 è localizzato nel nucleo e strettamente associato al DNA cromosomico.

Questo anticorpo riconosce specificamente la forma monometilata di H3K9. A causa della natura conservata del sito di modifica, si prevede che reagisca con più specie e sottotipi di H3.

Guida Sperimentale e Suggerimenti Tecnici

• Preparazione del campione per WB: Considerare l'uso di istoni estratti con acido o lisati arricchiti di nucleo per migliorare il rapporto segnale-rumore. Per i lisati cellulari totali, includere appropriati cocktail di inibitori delle proteasi ed evitare condizioni di denaturazione che possano rimuovere le modifiche istoniche.
• Validazione della specificità: In qualsiasi saggio, confermare la specificità dell'anticorpo utilizzando peptidi sintetici K9 monometilati vs. non metilati in un esperimento di competizione con peptide (dot blot o ELISA). Un array di proteine istoniche H3 ricombinanti con stati di metilazione definiti può anche servire come controllo rigoroso.
• Ottimizzazione del ChIP: Per l'immunoprecipitazione della cromatina, il tempo di cross-link, la quantità di anticorpo e le condizioni di sonicazione devono essere determinate empiricamente. L'elevata avidità dell'anticorpo per il segno monometilato potrebbe richiedere meno anticorpo per reazione rispetto agli anticorpi pan-H3. Includere sempre un controllo di blocco con peptide specifico per la monometilazione.
• Considerazioni per IHC e IF: La fissazione e il recupero dell'antigene possono influenzare l'accessibilità dell'epitopo. Per IHC-P, i protocolli standard su tessuti fissati in formalina e inclusi in paraffina (FFPE) con un passaggio di recupero dell'antigene mediato dal calore (buffer citrato, pH 6.0) spesso funzionano bene; tuttavia, si consiglia un test preliminare. Nell'immunofluorescenza, una breve permeabilizzazione con metanolo può migliorare la colorazione nucleare.
• Applicazioni ELISA/dot blot: Rivestire le piastre con peptide H3(1-21) monometilato o H3K9me1 ricombinante a lunghezza intera per valutare l'affinità di legame e la linearità. Utilizzare peptide coniugato a BSA come alternativa.
• Cross-reattività tra specie: Sebbene sia prevista un'ampia reattività, raccomandiamo di validare l'anticorpo nel vostro specifico sistema di campioni (es. topo, ratto o altre specie rilevanti) prima di esperimenti su larga scala.

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