Anticorpo Monoclonale Coniglio MonoMetil-Istona H3-K9 (Q16695/P68431) per WB, IHC, ChIP, ELISA

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'Istona H3

L'istona H3 è un componente principale del nucleosoma, l'unità fondamentale ripetuta della cromatina. I nucleosomi avvolgono e compattano il DNA, regolando così l'accesso per la trascrizione, la replicazione e la riparazione. Sia l'istona canonica dipendente dalla replicazione H3.1 (UniProt P68431) che la variante specifica del testicolo H3.1t (UniProt Q16695) condividono code N-terminali altamente conservate, dove avvengono le modifiche regolatorie chiave.

La coda N-terminale dell'istona H3 è soggetta a una vasta gamma di modifiche post-traduzionali (PTM), inclusa metilazione, acetilazione, fosforilazione, citrullinazione e altre. Queste modifiche costituiscono il "codice delle istoni", governando la struttura della cromatina e l'espressione genica. La metilazione della lisina 9 (K9; corrispondente alla posizione 10 nel precursore completo) è un marcatore epigenetico critico. L'H3K9 monometilata (H3K9me1) è associata al silenziamento trascrizionale e alla formazione dell'eterocromatina, e può servire come substrato per ulteriore metilazione da parte di specifiche metiltransferasi.

Questo anticorpo monoclonale di coniglio è stato generato contro un peptide sintetico monometilato attorno alla K9 dell'istona H3.1 umana (P68431), consentendo il rilevamento specifico di H3K9me1. Non riconosce le forme non metilate o metilate in modo diverso (es. H3K9me2/me3), come confermato dalla progettazione dell'immunogeno.

Localizzazione subcellulare: L'istona H3 è prevalentemente nucleare e associata ai cromosomi. Specificità tissutale: Le varianti canoniche H3.1 sono espresse nella maggior parte delle cellule in divisione, mentre la variante H3.1t (Q16695) è espressa specificamente nelle cellule testicolari.

Riferimenti correlati: PMID:11242053; PMID:16267050; PMID:17194708.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico monometilato attorno alla K9; la specificità per H3K9me1 dovrebbe essere verificata utilizzando saggi di competizione peptidica con peptidi K9 non modificati, mono-, di- e trimetilati come controlli negativi e positivi.
• Nel Western blot (WB) e nel dot blot (DB), ci si aspetta una banda/macchia a circa 16 kDa. Assicurarsi di un'estrazione istonica corretta e una normalizzazione del carico con l'anticorpo H3 totale.
• Per l'immunoistochimica (IHC-P) e l'immunofluorescenza (IF/ICC), ottimizzare il recupero dell'antigene e le condizioni di blocco per ogni tipo di tessuto/cellula per ottenere una colorazione nucleare specifica.
• L'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) utilizzando questo anticorpo può mappare le distribuzioni genomiche di H3K9me1; il cross-linking e la quantità di anticorpo richiedono un'ottimizzazione empirica. Considerare la ChIP sequenziale per confermare la specificità della monometilazione.
• L'anticorpo è previsto che cross-reatisca con un'ampia gamma di specie a causa dell'alta conservazione della sequenza dell'N-terminale di H3; la validazione nel sistema di campione pertinente (es. topo, ratto) è raccomandata.
• Nell'ELISA, l'anticorpo può fungere da reagente di cattura o rilevamento per la quantificazione di H3K9me1 in istoni estratti o nucleosomi.

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