Anticorpo policlonale coniglio MonoMetil-Istone H3-R2 (Q16695/P68431) | WB, IF/ICC, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H3 (H3.1/H3.1t)

• L'istone H3 è un componente centrale del nucleosoma, che avvolge compatta il DNA nella cromatina. Questo limita l'accessibilità al DNA e svolge un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. L'accessibilità al DNA è controllata dal "codice dell'istone": un complesso insieme di modifiche post-traduzionali (PTM) e rimodellamento del nucleosoma.
• La proteina si localizza nel nucleo e sui cromosomi.
• Sono rilevanti due isoforme principali: H3.1 (codificato da più geni, ad esempio H3C1, H3C2, ecc., UniProt P68431) è espresso nella maggior parte delle cellule somatiche, mentre H3.1t (H3-4, HIST3H3, UniProt Q16695) è specifico del testicolo.
• La coda N-terminale dell'istone H3 è soggetta a numerose PTM, tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione, citrullinazione e altre. In particolare, l'arginina 2 (R2) può essere metilata. La dimetilazione asimmetrica in questo sito è catalizzata da PRMT6 ed è associata alla regolazione trascrizionale. La monometilazione in R2 è una fase intermedia e può avere ruoli funzionali distinti. Questo anticorpo riconosce specificamente la forma monometilata di R2. Riferimenti correlati: PMID:17898714, PMID:18077460, PMID:18079182

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico monometilato intorno alla posizione R2 dell'istone H3 umano. Quando esegui il western blot (WB), considera l'utilizzo di estratti nucleari o preparazioni arricchite di istoni per aumentare il segnale. Il peso molecolare previsto è di ~15 kDa, ma le bande possono apparire leggermente più alte a causa delle PTM o delle interazioni proteiche.
• Per l'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), le condizioni di fissazione e permeabilizzazione potrebbero richiedere ottimizzazione. Poiché l'istone H3 è nucleare, si consiglia la permeabilizzazione con Triton X-100 o metanolo. Convalida il pattern di colorazione rispetto a marcatori nucleari noti.
• In ELISA, considera l'utilizzo di un peptide metilato come antigene di rivestimento per confermare la specificità per R2 monometilato rispetto alle forme non modificate o dimetilate.
• La reattività crociata tra specie è prevista ampia (umana, topo, ratto e altre), ma è consigliabile verificare la reattività nel sistema di campioni specifico di interesse, specialmente per specie non mammiferi.
• Come anticorpo policlonale di coniglio, la coerenza tra lotti deve essere valutata per saggi quantitativi critici. L'inclusione di controlli positivi e negativi appropriati (ad esempio, competizione con peptide monometilato) può migliorare l'affidabilità dei dati.

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