MonoMethyl-Histone H4-K20 Anticorpo Policlonale di Coniglio (P62805) – Anticorpo per Ricerca Epigenetica per WB, IHC, IF/ICC, ELISA

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'Istone H4

L'istone H4 è un componente centrale del nucleosoma, l'unità fondamentale della cromatina. Insieme agli istoni H2A, H2B e H3, forma un ottamero attorno al quale si avvolge il DNA, compattando il genoma all'interno del nucleo. Questo ruolo strutturale è fondamentale per tutti i processi templati dal DNA, inclusi trascrizione, replicazione, riparo e segregazione cromosomica.

L'istone H4 si localizza principalmente nel nucleo ed è associato ai cromosomi durante tutto il ciclo cellulare. Durante la spermatogenesi, specifici pattern di acetilazione possono influenzarne la localizzazione nucleare.

La funzione e le interazioni dell'istone H4 sono regolate dinamicamente da una vasta gamma di modificazioni post-traduzionali (PTM), spesso indicate come "codice istonico". Queste includono acetilazione, metilazione, fosforilazione, citrullinazione, ubiquitinazione e varie acilazioni in più residui. Tali segni alterano la struttura della cromatina e reclutano proteine effettrici per modulare l'espressione genica, la risposta al danno del DNA e il rimodellamento della cromatina.

Tra queste, la metilazione della lisina 20 (H4K20) è un marcatore epigenetico critico. La monometilazione di H4K20 (H4K20me1) è coinvolta nell'attivazione trascrizionale, nella progressione del ciclo cellulare e nella risposta al danno del DNA. L'equilibrio tra gli stati di mono-, di- e trimetilazione in questo sito è strettamente controllato da specifiche metiltransferasi e demetilasi.

Questo anticorpo è stato generato contro un peptide sintetico corrispondente alla regione circostante K20 dell'istone H4 umano, portante una modifica di monometilazione. È progettato per riconoscere specificamente solo la forma monometilata di H4K20, rendendolo uno strumento prezioso per studiare i distinti esiti biologici dei diversi stati di metilazione di H4K20.

Riferimenti correlati: UniProt P62805

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Poiché l'istone H4 è altamente conservato negli eucarioti, si prevede che questo anticorpo reagisca con molte specie. Tuttavia, la reattività incrociata dovrebbe essere verificata empiricamente per sistemi non umani/topo/ratto.
• Per il western blotting, arricchire le proteine istoniche o utilizzare metodi di estrazione acida per migliorare il rilevamento di H4K20me1, poiché gli istoni possono essere mascherati da proteine non istoniche abbondanti nei lisati cellulari totali.
• Nelle applicazioni di dot blot (DB), includere controlli con peptide non modificato e monometilato per confermare la specificità per la modificazione.
• Per l'immunoistochimica (IHC), potrebbero essere necessari passaggi di recupero dell'antigene a causa della stretta associazione degli istoni con il DNA nei tessuti fissati in formalina.
• Quando si utilizza l'immunofluorescenza (IF/ICC), effettuare una co-colorazione con un marcatore nucleare per confermare l'attesa localizzazione nucleare.
• I protocolli ELISA dovrebbero utilizzare peptidi immobilizzati o estratti istonici. Assicurarsi che l'antigene di rivestimento presenti l'epitopo K20 monometilato per un rilevamento ottimale.
• Questo anticorpo è specifico per la monometil-K20 e non rileva la K20 di- o trimetilata o l'H4 non modificato in base al design dell'immunogeno. Tuttavia, convalidare la specificità nel vostro sistema campione utilizzando appropriati controlli negativi (ad esempio, linee cellulari con stato di metilazione H4K20 alterato).

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