pAb coniglio MonoMethyl-Histone H4-K5 (P62805) per IF/ICC e ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H4

• Funzione: L'istone H4 è un componente centrale del nucleosoma, che avvolge compatta il DNA nella cromatina. Questo limite l'accessibilità al DNA e svolge un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. I nucleosomi sono composti da due copie di ciascun istone H2A, H2B, H3 e H4, che formano un ottamero attorno al quale sono avvolti 147 paia di basi di DNA. Il codice istonico, mediato dalle modifiche post-traduzionali, regola l'accessibilità al DNA e il rimodellamento nucleosomico. Riferimenti correlati: UniProtKB P62805

• Localizzazione subcellulare: L'istone H4 è localizzato principalmente nel nucleo e si associa ai cromosomi. L'acetilazione può influenzare la sua distribuzione subnucleare; per esempio, l'H4 acetilato si localizza nel nucleo negli spermatidi allo stadio 11. Riferimenti correlati: UniProtKB P62805

• Modifiche post-traduzionali: L'istone H4 subisce numerose modifiche post-traduzionali, in particolare sulla sua coda N-terminale. L'acetilazione avviene su più lisine (es. K6, K9, K13, K17, K32, K92; vedi PMID:19608861). La metilazione si trova sull'arginina 4 (dimetilazione asimmetrica da parte di PRMT1; PMID:11387442) e sulla lisina 21 (monometilazione; PMID:12086618). La monometilazione sulla lisina 5 (K5me1) è un marcatore epigenetico specifico riconosciuto da diverse proteine lettrici e implicato nella regolazione trascrizionale. Altre modifiche includono la fosforilazione, la citrullinazione e l'ubiquitinazione, che formano complessivamente un codice regolatore complesso. Riferimenti correlati: PMID:19608861, PMID:11387442, PMID:12086618

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Progettazione dell'immunogeno: Questo anticorpo è stato prodotto contro un peptide sintetico corrispondente alla regione N-terminale dell'istone H4 umano monometilato sulla K5. Quando si progettano anticorpi simili, assicurarsi che il peptide sia di elevata purezza e che la modifica sia confermata da spettrometria di massa. È consigliabile utilizzare un peptide non metilato come controllo negativo nei saggi per verificare la specificità.
• IF/ICC: Per l'immunofluorescenza, una fissazione standard con paraformaldeide al 4% e permeabilizzazione con 0,1-0,5% di Triton X-100 è generalmente adatta. Bloccare il legame aspecifico con BSA al 5% o siero. L'accessibilità all'epitopo può variare; si può valutare l'ottimizzazione del recupero dell'antigene. Poiché le proteine istoniche sono nucleari, è prevista una colorazione nucleare. Includere controlli senza anticorpo primario per valutare il fondo.
• ELISA: Per il coating, diluire l'anticorpo o l'antigene in tampone carbonato/bicarbonato (pH 9,6). Titolare la concentrazione dell'anticorpo per determinare il rapporto segnale/rumore ottimale. Utilizzare il peptide monometilato come controllo positivo e il peptide non modificato come controllo negativo per confermare la specificità.
• Generali: Come per qualsiasi anticorpo specifico per una modifica, possono verificarsi variazioni da lotto a lotto; validare i nuovi lotti nel vostro sistema sperimentale specifico. La reattività crociata è prevista per uomo, topo e ratto in base alla conservazione della sequenza; testatela sulla specie di vostro interesse.

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