MonoMethyl-Histone H4-R3 Rabbit pAb (P62805) | Anticorpo pronto per IF/ICC, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H4

L'istone H4 è una delle proteine istoniche fondamentali che, insieme a H2A, H2B e H3, forma il nucleosoma—the fundamental repeating unit of chromatin. Ogni nucleosoma consiste in 147 paia di basi di DNA avvolte attorno a un otamero di due copie di ciascuna delle quattro istoni fondamentali. Questa struttura compatta il DNA genomico, ma serve anche come piattaforma dinamica per la regolazione dell'accessibilità del DNA. L'istone H4 svolge un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. Questi processi sono strettamente controllati da un vasto insieme di modificazioni post-traduzionali sulle code degli istoni, collettivamente definite come "codice degli istoni", che orchestrano il rimodellamento del nucleosoma e il reclutamento di proteine effetrici.

L'istone H4 è localizzata prevalentemente nel nucleo, dove si associa ai cromosomi durante tutto il ciclo cellulare. Durante la spermatogenesi, l'H4 acetilata mostra specifici pattern di localizzazione nucleare negli spermatidi in allungamento.

La coda N-terminale dell'istone H4 è soggetta a una vasta gamma di modificazioni post-traduzionali, tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione, citrullinazione e molte altre. La metilazione dei residui di arginina è un marcatore regolatorio chiave. La monometilazione all'arginina 3 (H4R3me1) è catalizzata da protein arginine methyltransferases ed è stata implicata nella regolazione trascrizionale e nell'istituzione degli stati della cromatina.

Riferimenti correlati: PMID:11387442, PMID:11448779, PMID:15345777

Data la sua alta conservazione attraverso le specie, la sequenza dell'istone H4 e i suoi pattern di modificazione sono ampiamente conservati dal lievito all'uomo, supportando l'ampia reattività crociata di questo anticorpo.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Dato che questo anticorpo è stato prodotto contro un peptide sintetico monometilato corrispondente ai residui attorno a R3 dell'istone H4 umana, ci si aspetta che riconosca specificamente la forma monometilata di H4R3. I ricercatori dovrebbero considerare la validazione della specificità utilizzando saggi di competizione peptidica o con linee cellulari trattate con inibitori delle metiltransferasi.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), la fissazione standard con paraformaldeide al 4% seguita dalla permeabilizzazione con Triton X-100 allo 0,1–0,5% è tipicamente compatibile con il rilevamento degli istoni. Si consiglia la controcolorazione nucleare (es. DAPI) per confermare la localizzazione nucleare del segnale.
• Nelle applicazioni ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato per rilevare peptide sintetici H4R3 monometilati o estratti istonici da cellule. Considerare l'ottimizzazione del buffer di rivestimento e della diluizione dell'anticorpo per il proprio sistema di saggio specifico.
• Si prevede che l'anticorpo cross-reagisca con l'istone H4 di umano, topo e ratto, così come con un'ampia gamma di altre specie a causa dell'alta conservazione della sequenza. Tuttavia, la reattività crociata dovrebbe essere convalidata sperimentalmente nel sistema di campione pertinente.

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