Anticorpo policlonale coniglio contro MonoMetil-Istone H4-R3 | P62805 | WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H4

L'istone H4 è un componente fondamentale del nucleosoma, attorno al quale sono avvolti circa 147 paia di basi del DNA genomico. In quanto parte dell'ottamero di istoni, svolge ruoli essenziali nella regolazione della trascrizione, della replicazione e riparazione del DNA e della stabilità cromosomica. La modificazione dinamica post-traduzionale degli istoni, denominata collettivamente "codice istonico", governa la struttura della cromatina e l'espressione genica. Riferimenti correlati: UniProt P62805

L'istone H4 si localizza prevalentemente nel nucleo e si associa ai cromosomi per tutto il ciclo cellulare. La forma acetilata di H4 è stata osservata specificamente nel nucleo degli spermatidi allo stadio 11, indicando un ruolo nella compattazione della cromatina durante la spermatogenesi. Riferimenti correlati: UniProt P62805

La coda N-terminale dell'istone H4 è soggetta a numerose modificazioni post-traduzionali, tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione, citrullinazione e vari eventi di acilazione. L'arginina 3 (R3; corrispondente a R4 nella proteina processata dopo la rimozione della metionina iniziale) è un residuo chiave che può essere monometilato, dimetilato asimmetricamente (da PRMT1), dimetilato simmetricamente (da PRMT5/PRMT7) o convertito in citrullina. Il presente anticorpo riconosce specificamente la forma monometilata dell'istone H4 in posizione arginina 3. Riferimenti correlati: PMID:11387442, PMID:11448779, PMID:15345777, PMID:16567635

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Progettazione dell'immunogeno: L'anticorpo è stato prodotto contro un peptide sintetico monometilato corrispondente all'arginina 3 dell'istone H4 umano (NP_003529.1). Per valutare la specificità, si consigliano saggi di competizione peptidica o dot blot con peptidi modificati in modo differenziale, per confermare il riconoscimento selettivo della monometilazione rispetto all'arginina 3 non modificata o dimetilata.
• Western blotting (WB): L'istone H4 ha un peso molecolare previsto di ~11 kDa; per una risoluzione ottimale si consigliano gel SDS-PAGE ad alta percentuale (15% o gradiente). Estratti nucleari o istoni estratti con acido danno generalmente segnali più intensi. A causa delle piccole dimensioni, verificare l'efficienza del trasferimento e utilizzare membrane appropriate (ad esempio PVDF 0,2 µm).
• Immunoistochimica (IHC-P) e immunocitochimica/immunofluorescenza (IF/ICC): È previsto un pattern di colorazione prevalentemente nucleare. È necessario ottimizzare il recupero dell'antigene (ad esempio tampone citrato, pH 6,0) per sezioni includute in paraffina e la permeabilizzazione con detergenti per le cellule. La reattività crociata dell'anticorpo con tessuti di topo e ratto lo rende adatto allo studio delle modificazioni istoniche in diversi sistemi modello.
• ELISA: Il peptide monometilato può essere utilizzato come antigene di rivestimento per ELISA diretta o competitiva, per quantificare l'affinità di legame e la specificità dell'anticorpo. I fattori di diluizione devono essere titolati in base al formato del saggio.
• Reattività crociata tra specie: È riportato che l'anticorpo riconosce l'istone H4 di uomo, topo e ratto, e si prevede la reattività con un'ampia gamma di altre specie grazie all'estrema conservazione della sequenza dell'istone H4. Per specie non testate, verificare l'omologia della sequenza peptidica nella regione dell'immunogeno.
• Considerazioni sugli anticorpi policlonali: Essendo un anticorpo policlonale di coniglio, possono verificarsi variabilità tra lotti nel titolo e nel segnale di fondo. Includere controlli positivi e negativi appropriati e ri-validare ogni nuovo lotto nelle vostre condizioni sperimentali.

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