Anticorpo policlonale coniglio MonoMethyl-NONO/p54nrb (R357/R365) (Q15233) per WB, IF/ICC, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NONO/p54nrb

NONO (proteina legante l'ottamero priva di dominio POU), nota anche come p54nrb, è una proteina legante il DNA e l'RNA multifunzionale coinvolta in diversi processi nucleari. Si lega sia al DNA a doppia che a singola elica e all'RNA, partecipa allo splicing del pre-mRNA probabilmente come eterodimero con SFPQ e interagisce con l'U5 snRNA. NONO è essenziale per la formazione dei paraspeckles insieme a PSPC1 e contribuisce alla riparazione del DNA tramite giunzione di estremità non omologa (NHEJ) stabilizzando le estremità del DNA con il dimero Ku70/Ku80.

Nella regolazione trascrizionale, NONO forma un complesso con SFPQ e NR5A1 per modulare l'attività del promotore CYP17. Regola anche l'orologio circadiano reprimendo la transattivazione di CLOCK-BMAL1, influenza l'organizzazione delle sinapsi GABAergiche e promuove la differenziazione neuronale reclutando TET1 nei loci genomici.

NONO svolge un ruolo critico nell'immunità innata assemblandosi nel complesso HDP-RNP, che funge da piattaforma per la fosforilazione di IRF3, attivando così la via cGAS-STING in risposta all'infezione da virus a DNA. Durante l'infezione da HIV-2, NONO interagisce con la proteina del capside virale p24 per facilitare il rilevamento del DNA virale da parte di cGAS.

A livello subcellulare, NONO è prevalentemente nucleare, concentrandosi nei nucleoli, negli speckles nucleari e nei paraspeckles puntiformi adiacenti agli speckles di splicing.

NONO è ampiamente espresso nel cuore, cervello, placenta, polmone, fegato, muscolo scheletrico, rene, pancreas e in varie linee cellulari di tumore al seno. La proteina subisce estese modificazioni post-traduzionali, tra cui acetilazione, fosforilazione e metilazione (es. monometilazione a R456). Questo anticorpo riconosce specificamente la forma mono-metilata alle arginine 357 e 365.

Riferimenti correlati: PMID:11525732, PMID:12403470, PMID:26571461, PMID:22416126, PMID:15590677, PMID:11897684, PMID:28712728, PMID:30270045, PMID:9341872, PMID:19608861, PMID:24129315

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Questo anticorpo policlonale coniglio è stato prodotto contro un peptide sintetico che trasporta la monometilazione a R357 e R365 di NONO/p54nrb umano. Per il Western blot, è prevista una banda intorno a 54 kDa. Validare la specificità confrontando l'intensità del segnale con la competizione del peptide non metilato o utilizzando controlli specifici per la metilazione.
• Per IF/ICC, può essere osservata una colorazione nucleare con arricchimento nei foci (paraspeckles). Considerare una colorazione simultanea con marcatori di paraspeckles (es. PSPC1) per confermare la localizzazione.
• L'anticorpo è dichiarato reagire con campioni umani e di ratto. La reattività crociata con altre specie non è stata testata; verificare nel proprio modello sperimentale.
• Le diluizioni di lavoro ottimali devono essere determinate empiricamente per ogni applicazione. Iniziare con 1:500–1:1000 per WB e 1:50–1:200 per IF/ICC, regolando secondo necessità.
• L'anticorpo viene fornito liquido con spedizione in borsa del ghiaccio; conservare a −20°C upon receipt. Evitare cicli ripetuti di congelamento-scongelamento.

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