Anticorpo Policlonale di Coniglio MonoMethyl-YAP1-K342 (P46937) per WB ed ELISA

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di YAP1

• YAP1 (Yes-associated protein 1) funziona come un coattivatore e corepressore trascrizionale, agendo come un effettore a valle cruciale della via di segnalazione Hippo. Questa via regola criticamente le dimensioni degli organi e sopprime la tumorigenesi limitando la proliferazione cellulare e promuovendo l'apoptosi (PMID:17974916, PMID:18280240, PMID:18579750, PMID:21364637, PMID:30447097). Riferimenti correlati: PMID:17974916, PMID:18280240, PMID:18579750, PMID:21364637, PMID:30447097.
• La fosforilazione da parte delle chinasi LATS1/2 sequestra YAP1 nel citoplasma, prevenendone la traslocazione nucleare e la conseguente attivazione della trascrizione dipendente da TEAD. Questa regolazione dipendente dalla fosforilazione è centrale nel suo ruolo nel controllo della crescita cellulare, della crescita indipendente dall'ancoraggio e della transizione epiteliale-mesenchimale (EMT) (PMID:18158288, PMID:26598551, PMID:34404733). Riferimenti correlati: PMID:18158288, PMID:26598551, PMID:34404733.
• YAP1 è soggetto a estese modificazioni post-traduzionali, inclusa fosforilazione su multipli residui di serina, treonina e tirosina, nonché ubiquitinazione e metilazione. La metilazione della lisina 342 (K342) è una modificazione specifica che questo anticorpo riconosce. Sebbene non sia ampiamente caratterizzata in UniProt, la metilazione in questo sito potrebbe influenzare le interazioni o la stabilità di YAP1, aggiungendo un ulteriore livello di regolazione della via Hippo.
• La localizzazione subcellulare di YAP1 è regolata dinamicamente; si localizza prevalentemente nel nucleo a bassa densità cellulare e si trasloca nel citoplasma ad alta densità cellulare, un processo modulato dalla fosforilazione. YAP1 si associa anche alle giunzioni strette e alla membrana cellulare in risposta a stimoli meccanici (PMID:18158288, PMID:20048001, PMID:31835537, PMID:25849865). Riferimenti correlati: PMID:18158288, PMID:20048001, PMID:31835537, PMID:25849865.
• L'analisi dell'espressione tessuto-specifica rivela livelli aumentati di YAP1 in alcuni tumori del fegato e della prostata, sottolineando il suo potenziale oncogenico. Inoltre, isoforme prive del dominio di transattivazione sono rilevate nei neuroni striatali di pazienti con malattia di Huntington (PMID:16461361, PMID:17974916, PMID:7782338). Riferimenti correlati: PMID:16461361, PMID:17974916, PMID:7782338.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Questo anticorpo è stato generato contro un peptide sintetico monometilato corrispondente ai residui intorno a K342 di YAP1 umano, rendendolo specifico per la forma metilata. Per un rilevamento ottimale in WB, considerare l'uso di protocolli di frazionamento nucleare e citoplasmatico per arricchire YAP1, poiché la sua localizzazione ne influenza l'abbondanza.
• Quando si esegue ELISA, includere un controllo con peptide non metilato per confermare la specificità. Un approccio ELISA competitivo con peptidi metilati e non metilati può aiutare a validare la specificità del segnale.
• La reattività crociata è prevista per topo e ratto in base all'omologia di sequenza; tuttavia, convalidare la reattività nel tessuto o nella linea cellulare rilevante prima di esperimenti su larga scala.
• Per il WB, sono adatte le condizioni standard di blocco e rilevamento; tuttavia, se compaiono bande aspecifiche, considerare di ottimizzare la diluizione dell'anticorpo (es. 1:500-1:2000) e la composizione del tampone di blocco.

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