Anticorpo monoclonale topo anti-umano CD15/SSEA-1 per citometria a flusso - P22083

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'Alfa-(1,3)-fucosiltransferasi 4 (FUT4)

• L'Alfa-(1,3)-fucosiltransferasi 4 (FUT4) è una glicosiltransferasi residente nell'apparato di Golgi che sintetizza il determinante glicanico Lewis X (LeX) (CD15) trasferendo fucosio in legame alfa(1,3) alla N-acetilglucosamina (GlcNAc) sulle catene di lattosammina di tipo 2. Riferimenti correlati: PMID:1702034, PMID:1716630, PMID:29593094
• CD15/LeX è un glicoepitopo chiave di superficie cellulare coinvolto nell'adesione cellulare, nella migrazione e nel riconoscimento delle cellule immunitarie, in particolare attraverso interazioni con le selectine (SELE, SELL, SELP) durante il traffico dei leucociti e l'homing.
• FUT4 lavora insieme a FUT7 per decorare i ligandi delle selectine con glicani fucosilati, un passaggio critico nella ricircolazione dei linfociti e nelle risposte infiammatorie.
• L'enzima può anche modificare accettori sialilati per generare i determinanti sialil Lewis X e 6‑sulfo sialil Lewis X, che fungono da ligandi ad alta affinità per la stessa famiglia di selectine. Riferimenti correlati: PMID:1716630, PMID:29593094
• FUT4 si localizza esclusivamente alla membrana del Golgi mediale/trans tramite un segnale di ancoraggio N‑terminale, compatibile con il suo ruolo nella elaborazione terminale dei glicani.
• L'espressione tissutale include cellule staminali mesenchimali, linee mieloide e linfoide, e promielociti immaturi, collegando CD15 sia alla differenziazione ematopoietica che alla biologia delle cellule staminali.
• Inoltre, FUT4 può fucosilare unità LacNAc interne per formare l'epitopo VIM‑2, un'altra struttura legante le selectine, diversificando ulteriormente i repertori di glicani di superficie cellulare. Riferimenti correlati: PMID:11278338, PMID:1716630

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Questo anticorpo coniugato è pronto all'uso per la citometria a flusso diretta; titolare l'anticorpo da 0,5–5 µg/mL per determinare la concentrazione di colorazione ottimale per il tipo di cellule.
• Utilizzare cellule umane vive, non fissate (es. leucociti del sangue periferico o linee cellulari coltivate) per preservare l'epitopo carboidrato nativo, poiché la fissazione può alterare il riconoscimento del CD15.
• Includere un controllo isotipo appropriato e utilizzare il blocco del recettore Fc per valutare il legame non specifico.
• Se è richiesta la colorazione intracellulare del Golgi, i protocolli di permeabilizzazione devono essere ottimizzati per mantenere le strutture membranari.

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