mAb di coniglio anti-MYLK per WB, ELISA - Q15746

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di MYLK

• MYLK codifica la chinasi della catena leggera della miosina della muscolatura liscia (MLCK), un enzima dipendente da calcio/calmodulina noto anche come proteina correlata alla chinasi (KRP) e telokin.
• Fosforila le catene leggere della miosina (MLC) per regolare la contrazione della muscolatura liscia e modula l'interazione actina-miosina attraverso un'attività non chinasica.
• È coinvolta in processi infiammatori quali apoptosi, permeabilità vascolare, diapedesi leucocitaria e iperreattività delle vie aeree associata all'asma.
• Promuove la migrazione cellulare e la metastasi tumorale attraverso meccanismi che includono la formazione di blebs di membrana dipendente da RhoA e l'attivazione del canale TRPC5.
• Si localizza nel citoplasma, nel lamellipodio, nel solco di clivaggio e nelle fibre da stress, dove controlla la dinamica del citoscheletro.
• È espressa nella muscolatura liscia e in vari tessuti fetali e adulti; l'isoforma non muscolare 2 è la variante di splicing predominante.
• La telokin si accumula negli enterociti intestinali ben differenziati in risposta al TNF, e l'attività chinasica è necessaria per la motilità gastrointestinale e la funzione della barriera epiteliale.
• Le principali caratteristiche molecolari includono lo splicing alternativo, il legame alla calmodulina, il legame all'actina, il legame all'ATP e l'attività di chinasi proteica serina/treonina.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Per il WB, considerare il peso molecolare di 211 kDa; utilizzare gel SDS-PAGE a bassa percentuale (ad es. 6-8%) e condizioni di trasferimento ottimizzate per proteine ad alto peso molecolare.
• Convalidare la specificità dell'anticorpo in lisati cellulari o tissutali che esprimono MYLK, come quelli di muscolatura liscia, cellule endoteliali o alcune linee cellulari tumorali.
• Per l'ELISA, l'abbinamento con anticorpi di rilevazione o saggi di competizione con il peptide può confermare il riconoscimento dell'epitopo; l'immunogeno è un peptide lineare compreso tra i residui 1800-1900.
• I metodi di fissazione e di recupero antigenico possono influenzare l'immunoreattività; testare condizioni appropriate per il tipo di campione.
• Tenere presente che lo splicing alternativo genera isoforme come la telokin (~17 kDa); durante l'utilizzo nel WB, confermare che la banda bersaglio corrisponda alla MYLK a lunghezza intera.
• La reattività crociata segnalata è umana; se necessario, convalidare le prestazioni con proteine ortologhe di altre specie.

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