NFKB1 Rabbit pAb per WB, IF/ICC, ELISA - P19838

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di NFKB1

• NFKB1 codifica per la proteina precursore p105 e la sua subunità p50 elaborata proteoliticamente (Fattore nucleare NF-kappa-B p50). Sebbene p105 funzioni da inibitore simile a IκB che trattiene i dimeri NF-κB nel citoplasma, la generazione di p50 consente il legame al DNA e la regolazione trascrizionale. Riferimenti correlati: PMID:1423592
• La subunità attiva p50 si associa a RELA/p65 per formare l'eterodimero p65-p50, un potente attivatore trascrizionale che si lega alla sequenza consenso κB 5'-GGRNNYYCC-3' nei potenziatori dei geni bersaglio. Riferimenti correlati: PMID:1740106, PMID:7830764
• I complessi NF-κB sono tipicamente sequestrati nel citoplasma dagli inibitori IκB. L'attivazione canonica coinvolge la fosforilazione mediata dalla chinasi IκB (IKK) e il successivo degrado proteasomico di IκB, rilasciando NF-κB per la translocazione nel nucleo.
• NF-κB è un fattore di trascrizione pleiotropico presente in quasi tutti i tipi cellulari e agisce come mediatore centrale delle risposte immunitarie e infiammatorie, nonché della sopravvivenza cellulare, della proliferazione e dell'apoptosi.
• L'omodimero p50-p50 funge da repressore trascrizionale a meno che non sia associato a BCL3, che lo converte in un attivatore. Pertanto, la composizione del dimero determina l'espressione del gene bersaglio.
• NFKB1 si localizza prevalentemente nel citoplasma nelle cellule a riposo, ma migra nel nucleo dopo l'attivazione, coerentemente con il suo ruolo di fattore responsivo ai segnali.
• Estese modificazioni post-traduzionali—inclusa la fosforilazione, l'acetilazione e l'ubiquitinazione—regolano con precisione la stabilità di NFKB1, l'attività di legame al DNA e l'output trascrizionale.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno (amminoacidi 41–365) si trova all'interno del dominio di omologia Rel N-terminale conservato tra p105 e p50. Nel western blotting, possono apparire sia la banda della p105 a lunghezza intera (~105 kDa) che quella della p50 elaborata (~50 kDa); confermare l'identità della banda utilizzando estratti cellulari e trattamenti appropriati.
• Per l'immunofluorescenza/ICC, NFKB1 è prevalentemente citoplasmatico in condizioni basali; la stimolazione con TNF-α o IL-1β può indurre una rapida translocazione nucleare. Includere controlli non trattati per visualizzare la ridistribuzione subcellulare.
• Quando si esegue un ELISA, considerare l'utilizzo della proteina ricombinante NFKB1 (p50) e di anticorpi di rilevamento accoppiati per validare specificità e sensibilità. Ottimizzare le condizioni di rivestimento e di blocco per il formato del saggio.
• Essendo un anticorpo policlonale, la coerenza tra lotti deve essere verificata con un lisato di controllo positivo standard o una proteina ricombinante.

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